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<em>In vitro</em> Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

The chronic nature of many diseases is attributed to the formation of bacterial biofilms which are recalcitrant to traditional antibiotic therapy. ...

The Research Institute at Nationwide Children's Hospital

&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x8868;&#x660E;&#x5F3C;&#x548C; com &#x57FA;&#x56E0;&#x7C07;&#x7684;&#x673A;&#x4F1A;&#x4E3B;&#x4E49;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x547C;&#x5438;&#x9053;&#x81F4;&#x75C5;&#x83CC;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6D41;&#x611F;&#x55DC;&#x8840;&#x6746;&#x83CC; &#xFF08;&#x5E02;&#x5357;&#x5929;&#x6D77;&#x4E00;&#xFF09;&#xFF0C;&#x5728;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6216;&#x591A;&#x4E2A;&#x4EA7;&#x54C1;&#x662F; IV &#x578B; &#xFF08;Tfp&#xFF09; &#x9739;&#x96F3;&#x751F;&#x6E90;&#x4E0E;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x672C;&#x6587;&#x6240;&#x8FF0;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x73B0;&#x5728;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA; pilABCD &#x548C; comABCDEF &#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7C07;&#x662F; operons&#xFF0C;&#x800C;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x4EA7;&#x54C1;&#x4E5F;&#x662F;&#x88AB;&#x6B63;&#x5E38;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x4E0E;&#x975E;&#x6781;&#x6027;&#x5220;&#x9664;&#x6BCF; 10 &#x5F3C;&#x548C; com &#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x4E86;&#x9075;&#x5B88;&#x7F3A;&#x9677;&#x65F6;&#x4E3B;&#x4EBA;&#x6C14;&#x9053;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x4E2D;&#x5F62;&#x6210;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x4E5F;&#x53D8;&#x5F97;&#x66F4;&#x52A0;&#x6697;&#x6DE1;&#x4F53;&#x5916;&#xFF0C;&#x548C;&#x53E6;&#x5916;&#xFF0C;&#x90FD;&#x6709;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x4E4B;&#x5904;&#x81EA;&#x7136;&#x8F6C;&#x5316;&#x3002;&#x96C6;&#x4F53;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B; operons &#x5185;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x4EA7;&#x54C1;&#x662F;&#x9700;&#x8981;&#x6B63;&#x5E38;&#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x751F;&#x548C; (&#x6216;) &#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5E02;&#x5357;&#x5929;&#x6D77;&#x4E00;&#x5168;&#x8981;&#x7D20;&#x751F;&#x4EA7;&#x7387;&#x3002; &#x57FA;&#x4E8E;&#x5176;&#x4ED6;&#x7C7B;&#x578B;&#x56DB; pilins PilA &#x76F8;&#x4F3C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x9884;&#x6D4B; pilA &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x4EA7;&#x54C1;&#x5C06;&#x662F;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684; pilin &#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x3002;&#x5B9E;&#x73B0;&#x6B64;&#x7ED3;&#x675F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x5C55;&#x793A;&#x4E86;&#x7531;&#x514D;&#x75AB;&#x80F6;&#x4F53;&#x91D1;&#x6807;&#x8BB0;&#x548C; PilA &#x7684;&#x786E;&#x662F;&#x7684;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x76AE;&#x6797;&#x5E02;&#x5357;&#x5929;&#x6D77;&#x4E00;&#x6240;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x7684; IV &#x578B;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x65B0;&#x7684;&#x89C2;&#x6D4B;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x65E8;&#x5728;&#x5256;&#x6790;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x7531;&#x5F3C;&#x548C; com &#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7C07;&#x5185;&#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x7801;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x5960;&#x5B9A;&#x4E86;&#x57FA;&#x7840;&#x3002;&#x7279;&#x70B9;&#x4E0E;&#x5E02;&#x5357;&#x5929;&#x6D77;&#x4E00;&#x6B96;&#x6C11;&#x5316;&#x6216;&#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x4E2D;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x89D2;&#x8272;&#x7684;&#x4E2A;&#x522B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x51CF;&#x8F7B;&#x8D1F;&#x62C5;&#x901A;&#x8FC7;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684; Tfp &#x6D3E;&#x751F;&#x7684;&#x75AB;&#x82D7;&#x6216;&#x88AB;&#x5B9A;&#x5411;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5E02;&#x5357;&#x5929;&#x6D77;&#x4E00;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x3002;

&#x4E0D;&#x53EF;&#x6D41;&#x611F;&#x55DC;&#x8840;&#x6746;&#x83CC; IV &#x578B;&#x9739;&#x96F3;&#xFF1A; &#x751F;&#x7269;&#x89D2;&#x8272;&#x7531;&#x5F3C;&#x548C; com operons &#x7F16;&#x7801;&#x7684;&#x4EA7;&#x54C1;&#x3002;

We previously demonstrated that one or more products of the genes in the pil and com gene clusters of the opportunistic human respiratory pathogen, nontypeable Haemophilus influenzae (NTHI), is required for type IV pili (Tfp) biogenesis and function. Herein, we have now demonstrated that the pilABCD and comABCDEF gene clusters are operons, and that the product of each gene is essential for normal pilus function. Mutants with nonpolar deletions in each of the 10 pil and com genes had an adherence defect when primary human airway cells were used as the target. These mutants were also diminished in their ability to form a biofilm in vitro, and additionally, were deficient in natural transformation. Collectively, our data demonstrate that the product of each gene within these operons is required for the normal biogenesis and/or function of NTHI Tfp. Based on similarity of PilA to other type IV pilins, we further predicted that the product of the pilA gene would be the major pilin subunit. Toward that end, we also demonstrated by immunogold labeling and mass spectrometry that PilA is indeed the majority type IV pilin protein expressed by NTHI. These new observations set the stage for experiments designed to dissect the function of each of the proteins encoded by genes within the pil and com gene clusters. The ability to characterize individual proteins with vital roles in NTHI colonization or pathogenesis has the potential to reduce the burden of NTHI-induced diseases through development of a Tfp-derived vaccine or a pilus-directed therapeutic.

Nontypeable Haemophilus influenzae type IV pili: biological roles of the products encoded by the pil and com operons.

Nous avons pr&#xE9;c&#xE9;demment montr&#xE9; que un ou plusieurs des produits des g&#xE8;nes dans le pil et groupes de g&#xE8;nes com de l&#x26;#39;agent pathog&#xE8;ne respiratoire humain opportuniste, Haemophilus influenzae non typable (NTHi), est n&#xE9;cessaire pour pili de type IV (PTF) biogen&#xE8;se et la fonction. Ici, nous avons maintenant d&#xE9;montr&#xE9; que le pilABCD et groupes de g&#xE8;nes sont comABCDEF op&#xE9;rons, et que le produit de chaque g&#xE8;ne est essentiel pour la fonction normale des pili. Mutants avec des d&#xE9;l&#xE9;tions non polaires dans chacun des g&#xE8;nes et de com pil 10 avait un d&#xE9;faut lorsque l&#x26;#39;adh&#xE9;rence des cellules primaires des voies respiratoires humaines ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;s comme cible. Ces mutants ont &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; diminu&#xE9;s dans leur capacit&#xE9; &#xE0; former un biofilm in vitro, et, en outre, des lacunes dans la transformation naturelle. Collectivement, nos donn&#xE9;es montrent que le produit de chaque g&#xE8;ne dans ces op&#xE9;rons est n&#xE9;cessaire pour la biogen&#xE8;se normale et / ou la fonction de NTHi PTF. Sur la base de la similitude des Pila &#xE0; l&#x26;#39;autre de type IV pilines, on en outre pr&#xE9;vu que le produit du g&#xE8;ne pila serait la sous-unit&#xE9; majeure de piline. &#xC0; cette fin, nous avons aussi d&#xE9;montr&#xE9; par immunomarquage et spectrom&#xE9;trie de masse que Pila est en effet le type IV majorit&#xE9; piline prot&#xE9;ine exprim&#xE9;e par NTHi. Ces nouvelles observations a ouvert la voie &#xE0; des exp&#xE9;riences visant &#xE0; diss&#xE9;quer la fonction de chacune des prot&#xE9;ines cod&#xE9;es par des g&#xE8;nes au sein de la pil et groupes de g&#xE8;nes com. La capacit&#xE9; &#xE0; caract&#xE9;riser les prot&#xE9;ines individuelles avec des r&#xF4;les vitaux dans la colonisation ou la pathog&#xE9;nie NTHi a le potentiel de r&#xE9;duire le fardeau de NTHi maladies induites par le d&#xE9;veloppement d&#x26;#39;un vaccin Tfp d&#xE9;riv&#xE9; ou un pilus th&#xE9;rapeutique dirig&#xE9;e.

Haemophilus influenzae non typable pili de type IV: R&#xF4;les biologiques des produits cod&#xE9;s par le Pil et op&#xE9;rons Com

Wir zuvor nachweislich ein oder mehrere Produkte der Gene in den Pil und com-gen-Clustern der opportunistischen menschlichen Atemwege Krankheitserreger, Nontypeable Haemophilus Influenzae (NTHI), f&uuml;r Typ IV Pili (Tfp) Biogenese und Funktion ben&ouml;tigt wird. Hier haben wir nun bewiesen, dass die PilABCD und ComABCDEF-Gen-Cluster Operone sind und das Produkt jedes Gen f&uuml;r normale Pilus-Funktion wesentlich ist. Mutanten mit unpolaren L&ouml;schungen in jedem der 10 Pil und com Gene hatte eine Einhaltung-Fehler beim prim&auml;ren menschlichen Atemwege Zellen als Ziel verwendet wurden. Diese Mutanten waren auch in ihrer F&auml;higkeit, ein Biofilm bilden vermindert waren in Vitro und zus&auml;tzlich einen Mangel an nat&uuml;rlichen Transformation. Zusammenfassend unsere Daten zeigen, dass das Produkt von jedem gen innerhalb dieser Operone ben&ouml;tigt f&uuml;r den normalen Biogenese und/oder Funktion der NTHI Tfp. gegr&uuml;ndet auf &Auml;hnlichkeit von PilA in anderen Typ IV Pilins, wir weiter voraus, dass das Produkt des Gens PilA der wichtigen pilin Untereinheit werden w&uuml;rde. Richtung, die zu beenden, wir zeigten auch von Immunogold beschriften und Massenspektrometrie, die PilA in der Tat ist die meisten Typ IV pilin Protein durch NTHI ausgedr&uuml;ckt. Diese neuen Beobachtungen bilden die B&uuml;hne f&uuml;r Experimente entwickelt, um die Funktion der einzelnen Proteine kodiert durch Gene innerhalb der Pil und com-Gen-Cluster zu sezieren. Die F&auml;higkeit, einzelne Proteine mit lebenswichtige Rollen in NTHI Kolonisation oder Pathogenese charakterisieren hat das Potenzial zur Verringerung der Belastung von NTHI-induzierte Krankheiten durch Entwicklung eines Impfstoffes Tfp-abgeleitet oder einen Pilus-Regie therapeutische.

Nontypeable Haemophilus Influenzae Typ IV Pili: biologische Rollen der Produkte durch die Pil und com Operone kodiert.

Abbiamo precedentemente dimostrato che uno o pi&ugrave; prodotti dei geni nel pil e com i cluster di gene di opportunistico patogeno respiratorio umano, nontypeable Haemophilus influenzae (NTHI), &egrave; obbligatorio per il tipo IV pili (Tfp) biogenesi e funzione. Qui, ora abbiamo dimostrato che il cluster di gene pilABCD e comABCDEF sono operoni, e che il prodotto di ogni gene &egrave; essenziale per la funzione normale pilus. Mutanti con le eliminazioni non polari in ciascuno dei 10 geni pil e com avevano un difetto di aderenza quando le cellule delle vie aeree umane primarie sono state utilizzate come destinazione. Questi mutanti sono stati diminuiti anche nella loro capacit&agrave; di formare un biofilm in vitro e inoltre, erano carenti di trasformazione naturale. Collettivamente, i nostri dati dimostrano che il prodotto di ogni gene entro questi operoni &egrave; necessario per il normale biogenesi e/o funzione di NTHI Tfp. basato su somiglianza di PilA di altro tipo IV pilins, ulteriormente predisse che il prodotto del gene della pilA sarebbe la subunit&agrave; maggiore pilin. Verso che fine, abbiamo anche dimostrato da immunogold etichettatura e spettrometria di massa PilA &egrave; infatti la maggior parte tipo IV pilin proteina espressa da NTHI. Queste nuove osservazioni impostare la fase di esperimenti progettati per sezionare la funzione di ciascuna delle proteine codificate da geni all&#39;interno del cluster gene pil e com. La capacit&agrave; di caratterizzare le singole proteine con ruoli vitali in colonizzazione NTHI o patogenesi ha il potenziale per ridurre l&#39;onere delle malattie dovute al NTHI attraverso lo sviluppo di un vaccino derivato da Tfp o un pilus-regia terapeutica.

Nontypeable Haemophilus influenzae pili di tipo IV: ruoli biologici dei prodotti codificati da operoni i pil e com.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x5F3C;&#x3068;&#x65E5;&#x548C;&#x898B;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x547C;&#x5438;&#x5668;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x3001;&#x5206;&#x985E;&#x4E0D;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6;&#x83CC;&#xFF08;NTHI&#xFF09;&#x306E;COM&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x4E00;&#x3064;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x88FD;&#x54C1;&#x306F;&#x3001;IV&#x578B;&#x7DDA;&#x200B;&#x200B;&#x6BDB;&#x6027;&#xFF08;TFP&#xFF09;&#x306E;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4ECA;pilABCD&#x3068;comABCDEF&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x304C;&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x5404;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7523;&#x7269;&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x7DDA;&#x6BDB;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3002;&#x521D;&#x4EE3;&#x30D2;&#x30C8;&#x6C17;&#x9053;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5834;&#x5408;&#x3001;10&#x5F3C;&#x3068;COM&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x6975;&#x6027;&#x6B20;&#x5931;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x4ED8;&#x7740;&#x6B20;&#x9665;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x304C;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3057;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x81EA;&#x7136;&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x63DB;&#x306E;&#x6B20;&#x640D;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x7DCF;&#x79F0;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x5185;&#x306E;&#x5404;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7523;&#x7269;&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x53CA;&#x3073;/&#x53C8;&#x306F;NTHI TFP&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x4ED6;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;IV pilins&#x3078;&#x30D4;&#x30E9;&#x306E;&#x985E;&#x4F3C;&#x6027;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B;pilum&#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x5F62;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7523;&#x7269;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30D4;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x3042;&#x308D;&#x3046;&#x3068;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x7D42;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x91D1;&#x6A19;&#x8B58;&#x3068;&#x30D4;&#x30E9;&#x306F;&#x78BA;&#x304B;&#x306B;NTHI&#x8868;&#x3055;&#x904E;&#x534A;&#x6570;&#x306E;IV&#x578B;&#x30D4;&#x30EA;&#x30F3;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x89B3;&#x5BDF;&#x306F;&#x3001;PIL&#x3068;COM&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x5185;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6BB5;&#x968E;&#x3092;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; NTHI&#x306E;&#x690D;&#x6C11;&#x5730;&#x5316;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3084;&#x75C5;&#x56E0;&#x306F;TFP&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7DDA;&#x6BDB;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x6CBB;&#x7642;&#x85AC;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x901A;&#x3057;&#x3066;&#x3001;NTHI&#x8A98;&#x767A;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x8CA0;&#x62C5;&#x3092;&#x8EFD;&#x6E1B;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5206;&#x985E;&#x4E0D;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6;&#x83CC;IV&#x578B;&#x7DDA;&#x6BDB;&#xFF1A;PIL&#x304A;&#x3088;&#x3073;Com&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x88FD;&#x54C1;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x5F79;&#x5272;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xAE30;&#xD68C;&#xC8FC;&#xC758;&#xC801; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD638;&#xD761;&#xAE30; &#xCCB4;&#xC758;, nontypeable Haemophilus &#xD615; (NTHI) &#xD544; &#xBC0F; com &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC81C;&#xD488; &#xC720;&#xD615; IV pili (Tfp) &#xC18D; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;&#xB294; &#xC124;&#xBA85;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xC81C; &#xC99D;&#xBA85; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4; pilABCD &#xBC0F; comABCDEF &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xB294; operons, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xAC01; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC81C;&#xD488; &#xC815;&#xC0C1; pilus &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xBCF8; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xAE30;&#xB3C4; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD55C; nonpolar &#xC0AD;&#xC81C; &#xAC01; 10 &#xD544;&#xC640; com &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC900;&#xC218; &#xACB0;&#xD568;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD588;&#xB2E4; &#xB610;&#xD55C; &#xD55C; biofilm&#xC744; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xB2A5;&#xB825;&#xC5D0; &#xC800;&#xD558;&#xB97C; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xAD00;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB610;&#xD55C;, &#xC790;&#xC5F0; &#xBCC0;&#xD658;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD80;&#xC871; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD1B5;&#xCE6D; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; operons &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC01; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC81C;&#xD488;&#xC740; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC18D; / &#xAE30;&#xB2A5; NTHI Tfp. &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB354; pilA &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC81C;&#xD488; &#xC8FC;&#xC694; pilin &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC788;&#xC744; &#xAC83; &#xC608;&#xC0C1; &#xB2E4;&#xB978; &#xC720;&#xD615; IV pilins Pila&#xC758; &#xC720;&#xC0AC;&#xC131;&#xC744; &#xBC14;&#xD0D5;&#xC73C;&#xB85C;. &#xADF8;&#xB97C; &#xD5A5;&#xD574; &#xB05D;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; immunogold &#xB77C;&#xBCA8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC99D;&#xBA85; &#xD558; &#xACE0; PilA &#xC2E4;&#xC81C;&#xB85C; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; &#xC785;&#xB825; &#xD45C;&#xD604; NTHI &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; pilin 4. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAD00;&#xCE21; &#xAC01; &#xD544; &#xBC0F; com &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD80;&#xD638;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD574; &#xBD80; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC124;&#xACC4; &#xB41C; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xBB34;&#xB300;&#xB97C; &#xC124;&#xC815;. &#xAC1C;&#xBCC4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; NTHI &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0; &#xB610;&#xB294; &#xBCD1; &#xC778;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5; &#xCE58;&#xB8CC; pilus &#xAC10;&#xB3C5; Tfp &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xBC31;&#xC2E0;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; NTHI &#xC720;&#xBC1C; &#xC9C8;&#xD658;&#xC758; &#xBD80;&#xB2F4;&#xC744; &#xC904;&#xC774;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC744;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0;.

Nontypeable Haemophilus &#xD615; &#xC720;&#xD615; IV pili: &#xD544; &#xBC0F; com operons&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xD488;&#xC758; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC5ED;&#xD560;.

Hemos demostrado anteriormente que uno o m&#xE1;s productos de los genes en el pil y grupos com genes del pat&#xF3;geno oportunista respiratoria humana, Haemophilus influenzae no tipificable (NTHi), se requiere para pili tipo IV (PTF) la biog&#xE9;nesis y la funci&#xF3;n. Aqu&#xED;, hemos demostrado ahora que el pilABCD y agrupaciones comABCDEF genes son operones, y que el producto de cada gen es esencial para la funci&#xF3;n normal de pilus. Los mutantes con deleciones no polares en cada uno de los 10 genes pil y COM ten&#xED;a un defecto adherencia cuando c&#xE9;lulas primarias de las v&#xED;as respiratorias humanas fueron utilizados como el blanco. Estos mutantes se disminuye tambi&#xE9;n en su capacidad para formar una biopel&#xED;cula in vitro, y adicionalmente, eran deficientes en transformaci&#xF3;n natural. Colectivamente, los datos demuestran que el producto de cada gen dentro de estos operones se requiere para la biog&#xE9;nesis normal y / o la funci&#xF3;n de NTHI PTF. Bas&#xE1;ndose en la similitud de la Pila de otro tipo IV pilins, se predijo adem&#xE1;s que el producto del gen pila ser&#xED;a la subunidad pilina importante. Con ese fin, tambi&#xE9;n demostrado por inmunomarcaje y espectrometr&#xED;a de masas que la Pila es de hecho la mayor&#xED;a de tipo IV pilin prote&#xED;na expresada por NTHI. Estas nuevas observaciones sentar las bases para experimentos dise&#xF1;ados para disecar la funci&#xF3;n de cada una de las prote&#xED;nas codificadas por los genes dentro de la pil y grupos de genes com. La capacidad para caracterizar las prote&#xED;nas individuales, con un papel vital en la colonizaci&#xF3;n NTHI o patog&#xE9;nesis tiene el potencial de reducir la carga de las enfermedades inducidas por NTHI a trav&#xE9;s del desarrollo de una vacuna contra la TFP-derivada o una terap&#xE9;utica dirigida pilus.

Amanda C. Dickson

Center for Microbial Pathogenesis

The Research Institute at Nationwide Children's Hospital

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide