intravital-microscopy-monocyte-homing-tumor-related-angiogenesis

Intravital Microscopy of Monocyte Homing and Tumor-Related Angiogenesis in a Murine Model of Peripheral Arterial Disease

The therapeutic goal for peripheral arterial disease and ischemic heart disease is to increase blood flow to ischemic areas caused by hemodynamic ...

University of Magdeburg

&#x7EFC;&#x5408;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4F5C;&#x7528;&#x3001; &#x795E;&#x7ECF;&#x53D1;&#x751F;&#x548C;&#x8865;&#x507F;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x7F3A;&#x8840;&#x6027;&#x4FAE;&#x8FB1;&#x7ED3;&#x679C;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x9700;&#x8981;&#x8BC4;&#x4F30;&#x7684;&#x5F62;&#x6001;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x53C2;&#x6570;&#x3002;&#x884C;&#x4E3A;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x662F;&#x5FC5;&#x4E0D;&#x53EF;&#x5C11;&#x7684;&#x8BB0;&#x5F55;&#x5728;&#x6574;&#x4E2A;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x6027;&#x80FD;&#x65F6;&#xFF0C;&#x7ED3;&#x679C;&#x627F;&#x62C5;&#x4E34;&#x5E8A;&#x524D;&#x7684;&#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#x7684;&#x9884;&#x6D4B;&#x503C;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x662F;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x5185;&#x76AE;&#x7D20;-1 (eMCAO)&#xFF0C;&#x7ED3;&#x679C;&#x5728;&#x76F8;&#x5BF9;&#x6E29;&#x548C;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x8D64;&#x5B57;&#x6CE8;&#x5C04;&#x6DB2;&#x81F4;&#x5C40;&#x7076;&#x6027;&#x8111;&#x7F3A;&#x8840;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x534F;&#x8BAE;&#x5141;&#x8BB8;&#x4E2D;&#x719F;&#x7EC3;&#x7535;&#x673A;&#x6027;&#x80FD;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x7684;&#x5B9A;&#x91CF;&#x548C;&#x5B9A;&#x6027;&#x7684;&#x635F;&#x4F24;&#x548C;&#x654F;&#x611F;&#x6162;&#x6027;&#x7F3A;&#x8840;&#x540E;&#x65F6;&#x95F4;&#x95F4;&#x9694;&#x68C0;&#x6D4B;&#x6162;&#x6027;&#x8D64;&#x5B57;&#x3002;&#x68AF;&#x5C42;&#x6B65;&#x884C;&#x4EFB;&#x52A1; [J.Neurosci&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5; 115 (2002 &#x5E74;) 169] &#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7535;&#x673A;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x8BC4;&#x4F30;&#x719F;&#x7EC3;&#x6B65;&#x884C;&#x548C;&#x63AA;&#x65BD;&#x524D;&#x80A2;&#x548C;&#x540E;&#x80A2;&#x653E;&#x7F6E;&#xFF0C;&#x6B65;&#x8FDB;&#x548C; inter-limb &#x7684;&#x534F;&#x8C03;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x5BF9;&#x8111;&#x6897;&#x6B7B;&#x4F53;&#x79EF;&#x548C;&#x8FD0;&#x52A8;&#x6280;&#x80FD; (1) &#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7; pre-implanted &#x6307;&#x5BFC;&#x63D2;&#x7BA1;&#x6E05;&#x9192;&#x52A8;&#x7269;&#x548C; (2) &#x6C1F;&#x70F7;&#x9EBB;&#x9189;&#x4E0B;&#x76F4;&#x63A5;&#x6CE8;&#x5C04;&#x5185;&#x76AE;&#x7D20;-1 &#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x7684;&#x4E24;&#x79CD;&#x4E0D;&#x540C;&#x6280;&#x672F;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x68AF;&#x8E0F;&#x6B65;&#x8D70;&#x4EFB;&#x52A1;&#x662F;&#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x611F;&#x5E94;&#x6027;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8F83;&#x5C0F;&#x7684;&#x75C5;&#x53D8;&#x540E;&#x7684;&#x7CBE;&#x7EC6;&#x8FD0;&#x52A8;&#x529F;&#x80FD;&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x8BC4;&#x4F30;&#x3002;&#x5728;&#x52A8;&#x7269;&#x690D;&#x5165;&#x63D2;&#x7BA1;&#x4E0E;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x8F83;&#x5C0F;&#x7684;&#x6897;&#x6B7B;&#x9762;&#x79EF;&#x548C;&#x589E;&#x52A0;&#x7F3A;&#x8840;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x9EBB;&#x9189;&#x4E0B; eMCAO &#x524D;&#x653E;&#x7F6E;&#x9519;&#x8BEF;&#x8868;&#x660E;&#x5BF9;&#x4FA7;&#x524D;&#x80A2;&#x957F;&#x6301;&#x4E45;&#x635F;&#x5BB3;&#x5230; 4 &#x5468;&#x540E; eMCAO&#x3002;

&#x68C0;&#x6D4B;&#x6162;&#x6027;&#x611F;&#x89C9;&#x8FD0;&#x52A8;&#x673A;&#x80FD;&#x969C;&#x788D;&#x5728;&#x68AF;&#x5B50;&#x4E0A;&#x54CD;&#x4E2D;&#x5185;&#x76AE;&#x7D20;-1 &#x81F4;&#x8F7B;&#x5EA6;&#x5C40;&#x7076;&#x6027;&#x7F3A;&#x8840;&#x5927;&#x9F20;&#x7684;&#x884C;&#x8D70;&#x4EFB;&#x52A1;&#x3002;

A comprehensive evaluation of the effects of neuroprotection, neurogenesis, and compensatory mechanisms on the outcome of ischemic insults requires assessment of morphological and functional parameters. Behavioural tests are essential when recording performance throughout the time course of an experiment and the results bear predictive value in preclinical animal models. The goal of this study was to establish a behavioural test procedure for a model of transient focal ischemia induced by injection of endothelin-1 (eMCAO) that results in relatively mild behavioural deficits. The test protocol used in the present study allows evaluation of quantitative and qualitative impairments in skilled motor performance and is sensitive to detect chronic deficits at chronic post-ischemic time intervals. The ladder rung walking task [J. Neurosci. Methods 115 (2002) 169] is a motor test that assesses skilled walking and measures both forelimb and hindlimb placing, stepping and inter-limb co-ordination. In this study we tested the effect of two different technical variants of endothelin-1 application on infarct volume and motor skills (1) application via pre-implanted guiding cannula in awake animals and (2) via direct injection under halothane anaesthesia. We showed that the ladder rung walking task is sensitive in the assessment of loss of fine motor function after induction of relatively small lesions. In animals with implanted cannulas we found a smaller infarct area and an increase in placement errors prior to ischemia animals with eMCAO under anaesthesia showed a long lasting impairment of the contralateral forelimb up to 4 weeks post-eMCAO.

Detection of chronic sensorimotor impairments in the ladder rung walking task in rats with endothelin-1-induced mild focal ischemia.

Une &#xE9;valuation compl&#xE8;te des effets de la neuroprotection, la neurogen&#xE8;se, et des m&#xE9;canismes compensatoires sur le r&#xE9;sultat de l&#xE9;sions isch&#xE9;miques n&#xE9;cessite une &#xE9;valuation des param&#xE8;tres morphologiques et fonctionnelles. Les tests comportementaux sont essentiels lors de l&#x26;#39;enregistrement des performances tout au long de l&#x26;#39;&#xE9;volution dans le temps d&#x26;#39;une exp&#xE9;rience et les r&#xE9;sultats portent la valeur pr&#xE9;dictive des mod&#xE8;les animaux pr&#xE9;cliniques. Le but de cette &#xE9;tude &#xE9;tait d&#x26;#39;&#xE9;tablir une proc&#xE9;dure de test comportemental d&#x26;#39;un mod&#xE8;le d&#x26;#39;isch&#xE9;mie focale transitoire induite par injection d&#x26;#39;endoth&#xE9;line-1 (eMCAO) qui se traduit par des d&#xE9;ficits comportementaux relativement doux. Le protocole de test utilis&#xE9; dans la pr&#xE9;sente &#xE9;tude permet d&#x26;#39;&#xE9;valuer les d&#xE9;ficiences quantitatives et qualitatives de la performance du moteur qualifi&#xE9;e et est sensible pour d&#xE9;tecter les d&#xE9;ficits chroniques &#xE0; des intervalles de temps chroniques post-isch&#xE9;miques. Le barreau de l&#x26;#39;&#xE9;chelle de marche t&#xE2;che [J. Neurosci. M&#xE9;thodes 115 (2002) 169] est un test qui &#xE9;value la marche du moteur qualifi&#xE9;s et mesure &#xE0; la fois des membres ant&#xE9;rieurs et post&#xE9;rieurs mise en place, pas &#xE0; pas et inter-branche de la coordination. Dans cette &#xE9;tude nous avons test&#xE9; l&#x26;#39;effet de deux diff&#xE9;rentes variantes techniques de l&#x26;#39;endoth&#xE9;line-1 demande sur le volume de l&#x26;#39;infarctus et les habilet&#xE9;s motrices (1) demande par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire de pr&#xE9;-implant&#xE9; une canule de guidage dans les animaux &#xE9;veill&#xE9;s et (2) par injection directe dans anesth&#xE9;sie &#xE0; l&#x26;#39;halothane. Nous avons montr&#xE9; que la t&#xE2;che de marche &#xE9;chelle &#xE9;chelon est sensible dans l&#x26;#39;&#xE9;valuation de la perte de la motricit&#xE9; fine apr&#xE8;s l&#x26;#39;induction des l&#xE9;sions relativement petites. Chez les animaux avec des canules implant&#xE9;es, nous avons trouv&#xE9; une petite zone de l&#x26;#39;infarctus et une augmentation des erreurs de placement avant les animaux d&#x26;#39;isch&#xE9;mie avec eMCAO sous anesth&#xE9;sie a montr&#xE9; une d&#xE9;ficience de longue dur&#xE9;e de la patte ant&#xE9;rieure controlat&#xE9;rale jusqu&#x26;#39;&#xE0; 4 semaines apr&#xE8;s eMCAO.

D&#xE9;tection des d&#xE9;ficiences chroniques sensorimotrice dans la t&#xE2;che de barreau de l&#x26;#39;&#xE9;chelle de marche chez les rats avec l&#x26;#39;endoth&#xE9;line-1 induite par une isch&#xE9;mie focale doux

Nachweis von chronischen sensomotorischen Beeintr&#xE4;chtigungen in der Leitersprosse Fu&#xDF; Aufgabe bei Ratten mit Endothelin-1-induzierten milden fokalen Isch&#xE4;mie.

Una completa valutazione degli effetti di neuroprotezione, neurogenesi e meccanismi di compensazione sull&#39;esito di insulti ischemici richiede la valutazione di parametri morfologici e funzionali. Test comportamentali sono essenziali durante la registrazione delle prestazioni per tutta la durata del tempo di un esperimento e i risultati portano valore predittivo in modelli animali preclinici. L&#39;obiettivo di questo studio era di stabilire una procedura di test comportamentali per un modello di ischemia focale transitoria indotta dall&#39;iniezione di endotelina-1 (eMCAO) che si traduce in deficit comportamentali relativamente mite. Il protocollo di prova utilizzato nel presente studio permette la valutazione di menomazioni quantitative e qualitative in qualificati prestazioni motore ed &egrave; sensibile a rilevare carenze croniche ad intervalli di tempo il cronico. Il gradino della scala camminando compito [J. Neurosci. Metodi 115 (2002) 169] &egrave; un motore test che valuta walking qualificati e misura degli arti anteriori e l&#39;arto posteriore immissione, coordinamento passo-passo e inter-limb. In questo studio abbiamo testato l&#39;effetto di due diverse varianti tecniche di endotelina-1 applicazione sul volume di infarto e le capacit&agrave; motorie (1) applicazione tramite cannula pre-implanted guida negli animali svegli e (2) iniezione diretta sotto anestesia alotano. Abbiamo dimostrato che la scala rung camminando compito &egrave; sensibile nella valutazione della perdita di funzione motoria fine dopo l&#39;induzione di lesioni relativamente piccole. Negli animali con cannule impiantate abbiamo trovato un&#39;area pi&ugrave; piccola di infarto e un aumento di errori di posizionamento prima animali di ischemia con eMCAO sotto anestesia ha dimostrato un danno duraturo dell&#39;arto controlaterale fino a 4 settimane post-eMCAO.

Rilevamento di menomazioni sensomotorie croniche nella scala rung compito a piedi in ratti con ischemia focale lieve endotelina-1-indotta.

&#x795E;&#x7D4C;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x3001;&#x865A;&#x8840;&#x6027;&#x50B7;&#x5BB3;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306E;&#x4EE3;&#x511F;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x7DCF;&#x5408;&#x8A55;&#x4FA1;&#x306F;&#x3001;&#x5F62;&#x614B;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3092;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x30D1;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DE;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x8A18;&#x9332;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x884C;&#x52D5;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x304C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x524D;&#x81E8;&#x5E8A;&#x52D5;&#x7269;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;&#x4E88;&#x6E2C;&#x5024;&#x3092;&#x8CA0;&#x3046;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306F;&#x3001;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x8EFD;&#x5EA6;&#x306E;&#x884C;&#x52D5;&#x969C;&#x5BB3;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3059;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;-1&#x306E;&#x6CE8;&#x5165;&#xFF08;eMCAO&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x8A98;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x4E00;&#x904E;&#x6027;&#x5C40;&#x6240;&#x8133;&#x865A;&#x8840;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x884C;&#x52D5;&#x8A66;&#x9A13;&#x624B;&#x9806;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x719F;&#x7DF4;&#x3057;&#x305F;&#x904B;&#x52D5;&#x6027;&#x80FD;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5B9A;&#x6027;&#x7684;&#x306A;&#x6E1B;&#x640D;&#x306E;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x6162;&#x6027;&#x865A;&#x8840;&#x5F8C;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x9593;&#x9694;&#x3067;&#x6162;&#x6027;&#x7684;&#x306A;&#x8D64;&#x5B57;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x5C0F;&#x6587;&#x5B57;&#x304C;&#x533A;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BF;&#x30B9;&#x30AF;[J.&#x6B69;&#x304F;&#x30E9;&#x30C0;&#x30FC;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B0;&#x795E;&#x7D4C;&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5;115&#xFF08;2002&#xFF09;169]&#x719F;&#x7DF4;&#x3057;&#x305F;&#x6B69;&#x884C;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x3001;&#x524D;&#x80A2;&#x3068;&#x5F8C;&#x80A2;&#x3001;&#x914D;&#x7F6E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3068;&#x9593;&#x56DB;&#x80A2;&#x5354;&#x8ABF;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x899A;&#x9192;&#x52D5;&#x7269;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30D7;&#x30EC;&#x79FB;&#x690D;&#x30AC;&#x30A4;&#x30C9;&#x30AB;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EC;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x6897;&#x585E;&#x4F53;&#x7A4D;&#x3068;&#x904B;&#x52D5;&#x80FD;&#x529B;&#xFF08;1&#xFF09;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x4E0A;&#x3067;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;-1&#x3001;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;2&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x6280;&#x8853;&#x7684;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3057;&#x3001;&#xFF08;2&#xFF09;&#x30CF;&#x30ED;&#x30BF;&#x30F3;&#x9EBB;&#x9154;&#x4E0B;&#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x6CE8;&#x5C04;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30E9;&#x30C0;&#x30FC;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B0;&#x6B69;&#x884C;&#x30BF;&#x30B9;&#x30AF;&#x306F;&#x3001;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x75C5;&#x5909;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x5F8C;&#x306E;&#x7D30;&#x304B;&#x3044;&#x904B;&#x52D5;&#x6A5F;&#x80FD;&#x55AA;&#x5931;&#x306E;&#x8A55;&#x4FA1;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x79FB;&#x690D;&#x30AB;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EC;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x52D5;&#x7269;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x6897;&#x585E;&#x9818;&#x57DF;&#x304A;&#x3088;&#x3073;4&#x9031;&#x9593;&#x5F8C;eMCAO&#x306B;&#x53CD;&#x5BFE;&#x524D;&#x80A2;&#x306E;&#x9577;&#x671F;&#x7684;&#x306A;&#x969C;&#x5BB3;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x5168;&#x8EAB;&#x9EBB;&#x9154;&#x4E0B;eMCAO&#x3068;&#x306E;&#x4E8B;&#x524D;&#x306E;&#x865A;&#x8840;&#x52D5;&#x7269;&#x3078;&#x306E;&#x914D;&#x7F6E;&#x8AA4;&#x5DEE;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;-1&#x8A98;&#x767A;&#x6027;&#x306E;&#x8EFD;&#x5EA6;&#x306E;&#x5C40;&#x6240;&#x7684;&#x865A;&#x8840;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30E9;&#x30C0;&#x30FC;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B0;&#x30A6;&#x30A9;&#x30FC;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x30BF;&#x30B9;&#x30AF;&#x306E;&#x6162;&#x6027;&#x611F;&#x899A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x969C;&#x5BB3;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;

Neuroprotection, &#xC131;&#xCCB4;, &#xD5C8; &#xD608; &#xC131; &#xBAA8;&#xC695;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC0C1; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC885;&#xD569;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218;&#xC5D0; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD574;&#xC57C;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04; &#xACFC;&#xC815;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC131;&#xB2A5;&#xC744; &#xAE30;&#xB85D;&#xD560; &#xB54C; &#xD589;&#xB3D9; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB294; &#xD544;&#xC218; &#xACE0; &#xACB0;&#xACFC; &#xC804; &#xC784;&#xC0C1; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC608;&#xCE21; &#xAC12;&#xC744; &#xBD80;&#xB2F4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294; endothelin-1 (eMCAO)&#xB294; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC00;&#xBCBC;&#xC6B4; &#xD589;&#xB3D9; &#xC801;&#xC790;&#xC758; &#xC8FC;&#xC785;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xACFC;&#xB3C4; &#xCD08;&#xC810; &#xD5C8; &#xD608; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD589;&#xB3D9; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC808;&#xCC28;&#xB97C; &#xD655;&#xB9BD; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB41C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; &#xC219;&#xB828; &#xB41C; &#xBAA8;&#xD130; &#xC131;&#xB2A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC591;&#xC801; &#xBC0F; &#xC9C8;&#xC801; &#xC7A5;&#xC560;&#xC758; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xACE0; &#xB9CC;&#xC131; post-ischemic &#xC2DC;&#xAC04; &#xAC04;&#xACA9;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB9CC;&#xC131; &#xC801;&#xC790;&#xB97C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC791;&#xC5C5; [J. Neurosci &#xAC77;&#xB294; &#xC0AC;&#xB2E4;&#xB9AC; &#xAC00;&#xB85C; &#xB300;. &#xBC29;&#xBC95; 115 (2002) 169] &#xBAA8;&#xD130; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC219;&#xB828; &#xAC77;&#xACE0; &#xD3C9;&#xAC00; &#xACE0; forelimb &#xBC30;&#xCE58;, hindlimb&#xB97C; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xC2A4;&#xD14C;&#xD551; &#xBC0F; inter-limb &#xACF5;&#xB3D9;-&#xC548; &#xC218; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xACBD;&#xC0C9; &#xBCFC;&#xB968; &#xBC0F; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xB2A5;&#xB825; (1) &#xC751;&#xC6A9; &#xAE68;&#xC5B4; &#xB3D9;&#xBB3C; pre-implanted &#xC720;&#xB3C4; &#xC815; &#xB9E5;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xD558; &#xACE0; (2)&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC9C1;&#xC811; &#xBD84;&#xC0AC; halothane &#xB9C8; &#xCDE8;&#xC5D0;&#xC11C; endothelin 1 &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC758; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xAE30;&#xC220; &#xBCC0;&#xC885;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC0AC;&#xB2E4;&#xB9AC; &#xC6B8; &#xB838;&#xC73C; &#xBA74; &#xAC77;&#xB294; &#xC791;&#xC5C5;&#xC740; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xC740; &#xBCD1; &#xBCC0;&#xC758; &#xC720;&#xB3C4; &#xD6C4; &#xAD1C; &#xCC2E; &#xC544; &#xC694; &#xBAA8;&#xD130; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4;&#xC758; &#xD3C9;&#xAC00;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xB3D9;&#xBB3C; &#xC774;&#xC2DD;&#xB41C; &#xB27C;&#xC744; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC791;&#xC740; &#xACBD;&#xC0C9; &#xC601;&#xC5ED;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD558; &#xACE0; &#xD5C8; &#xD608; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xB9C8; &#xCDE8;&#xC5D0;&#xC11C; Emcao&#xB85C; &#xC774;&#xC804; &#xBC30;&#xCE58; &#xC624;&#xB958; &#xC99D;&#xAC00; &#xB098;&#xD0C0;&#xB098;&#xC11C; contralateral forelimb&#xC758; &#xC624;&#xB798; &#xACAC; &#xB518; &#xC7A5;&#xC560; 4 &#xC8FC; &#xAC8C;&#xC2DC;&#xBB3C;-eMCAO.

&#xC0AC;&#xB2E4;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB9CC;&#xC131; sensorimotor &#xC7A5;&#xC560; &#xD0D0;&#xC9C0; &#xAC77;&#xB294; &#xC791;&#xC5C5; &#xCD08;&#xC810; &#xD5C8; &#xD608; &#xAC00;&#xBCBC;&#xC6B4; endothelin 1 &#xC720;&#xBC1C; &#xB41C; &#xC950;&#xC5D0; &#xC6B8; &#xB838;&#xC73C; &#xBA74;.

Una evaluaci&#xF3;n exhaustiva de los efectos de neuroprotecci&#xF3;n, la neurog&#xE9;nesis, y los mecanismos de compensaci&#xF3;n en el resultado de lesiones isqu&#xE9;micas requiere una evaluaci&#xF3;n de los par&#xE1;metros morfol&#xF3;gicos y funcionales. Pruebas de comportamiento son esenciales cuando se graba el rendimiento durante todo el curso del tiempo de un experimento y los resultados tienen un valor predictivo de los modelos animales precl&#xED;nicos. El objetivo de este estudio fue establecer un procedimiento de prueba de comportamiento para un modelo de isquemia focal transitoria inducida por la inyecci&#xF3;n de la endotelina-1 (eMCAO) que se traduce en d&#xE9;ficits de comportamiento relativamente leves. El protocolo de ensayo utilizado en el presente estudio permite la evaluaci&#xF3;n de las deficiencias cuantitativas y cualitativas en el rendimiento de la destreza motora y es sensible para detectar los d&#xE9;ficits cr&#xF3;nicos en la cr&#xF3;nica intervalos de tiempo post-isqu&#xE9;micos. El pelda&#xF1;o de la escalera caminando tarea [J. Neurosci. M&#xE9;todos 115 (2002) 169] es una prueba de motor que eval&#xFA;a caminar calificados y mide tanto la pata delantera y patas traseras de colocaci&#xF3;n, paso a paso y entre las extremidades de coordinaci&#xF3;n. En este estudio se evalu&#xF3; el efecto de dos variantes diferentes t&#xE9;cnicas de aplicaci&#xF3;n de la endotelina-1 en el volumen del infarto y las habilidades motoras (1) solicitud por medio de pre-implantado c&#xE1;nula gu&#xED;a en animales despiertos y (2) a trav&#xE9;s de inyecci&#xF3;n directa bajo anestesia con halotano. Nos mostr&#xF3; que el pelda&#xF1;o de la escalera de trabajo a pie es sensible en la evaluaci&#xF3;n de la p&#xE9;rdida de la funci&#xF3;n motora fina despu&#xE9;s de la inducci&#xF3;n de lesiones relativamente peque&#xF1;as. En los animales con c&#xE1;nulas implantadas hemos encontrado un &#xE1;rea de infarto m&#xE1;s peque&#xF1;o y un aumento de los errores de colocaci&#xF3;n antes de animales con isquemia eMCAO bajo anestesia mostr&#xF3; un deterioro de larga duraci&#xF3;n de la extremidad anterior contralateral hasta 4 semanas post-eMCAO.

Detecci&#xF3;n de Alteraciones sensitivomotora cr&#xF3;nica en el pelda&#xF1;o de la escalera de Trabajo caminar en ratas con la endotelina-1 inducida por isquemia focal leve

Thrombin significantly influences neurodegenerative processes after ischemia. The current literature suggests that the effects are mediated via protease-activated receptors 1, 3 and 4 (PAR1, 3, 4). Therefore, we investigated with immunohistochemical methods whether focal cerebral ischemia altered the expression of PARs in the rodent brain. For this purpose, we used the model of endothelin-induced occlusion of the middle cerebral artery and the model of transcranial permanent occlusion of the middle cerebral artery in mice. In contrast to the exclusively neuronal staining in the brain parenchyma of naïve animals, PAR1 and PAR3 occurred in addition on microglial cells in the penumbra after transient and after permanent focal ischemia. Although microglia activation could be detected for several weeks after the insult, PAR1 and PAR3 were traceable on microglia only 12 and 48 h after the insult, but not on day 7 post-ischemia. PAR4 was expressed, both in naïve and in ischemic animals, exclusively in neuronal cells. However, at the border zone and within the infarct area, enhanced immunohistochemical PAR4 signals were recognized. From our data, we conclude that PAR1 and PAR3 could be involved in thrombin-modulated initiation of post-ischemic inflammation and PAR4 may be associated with neuronal degeneration.

Focal ischemia induces expression of protease-activated receptor1 (PAR1) and PAR3 on microglia and enhances PAR4 labeling in the penumbra.

Y-P30 is a polypeptide survival promoting factor that has significant impact on the survival and differentiation of neurons in the developing brain. To address its potential role in brain injury we tested its neuroprotective effects in the oxygen-glucose deprivation (OGD) model with hippocampal slice cultures as an in vitro assay for ischemia. We could demonstrate that supplementation with Y-P30 leads to a significant neuroprotection at concentrations of 200 nM and 2 microM when it was added to the medium of hippocampal slice cultures 2 h before starting the deprivation of oxygen and glucose. A significant neuroprotective effect was found when the peptide was applied 2 h after injury. Y-P30 oligomerises in large complexes, which might hinder the passage through the culture membranes in our system. We therefore also applied Y-P30 directly on the hippocampal slices, which led to the most robust neuroprotection even at very low concentrations.

Neuroprotective effects of the survival promoting peptide Y-P30.

Pituitary adenylate cyclase activating peptide (PACAP) and the chemokine stromal cell-derived factor (SDF-1) have been implicated in neuroprotection, neurogenesis, and regeneration. Focal ischemia is associated with rapid upregulation of PACAP in perifocal neurons and delayed induction of SDF-1 in hypoxic/ischemic tissues, the latter process being involved in the recruitment of stem cells and inflammatory cells. Here, we studied mRNA patterns of PACAP, SDF-1 and the cognate receptors PAC1 and CXCR4 by in situ hybridization in the rat hippocampus after transient global ischemia, a rat model for programmed death of CA1 pyramidal neurons. Cell death in CA1 was not associated with local induction of PACAP and SDF-1 expression or recruitment of CXCR4-expressing infiltrates. However, there was a transient, almost complete loss of SDF-1 expression in microvessels in all hippocampal regions. Granule cells transiently showed a decrease of SDF-1 and an increase of PACAP expression. While PAC1 mRNA was moderately decreased throughout the hippocampus, CXCR4 expression was selectively increased in the subgranular layer. We propose that altered PACAP and SDF-1 gene expression in granule cells plays a role in regulated neurogenesis after global ischemia. The finding that programmed neuronal death after global ischemia was not associated with SDF-1 upregulation or recruitment of CXCR4-expressing cells is in sharp contrast to SDF-1/CXCR4-mediated infiltration of infarct tissue after focal ischemia. Hence, the different modes of neuronal death after focal and global ischemia are associated with distinct SDF-1 and PACAP gene regulation patterns and distinct reorganization mechanisms.

Differential regulation of CXCL12 and PACAP mRNA expression after focal and global ischemia.

&#x591A;&#x5F62;&#x6838;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE; (PMN) &#x8C03;&#x89E3;&#x53D7;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x514D;&#x75AB;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E5F;&#x53EF;&#x80FD;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4E3B;&#x673A;&#x635F;&#x574F;&#xFF0C;&#x5982;&#x679C;&#x5176;&#x6548;&#x5E94;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0D;&#x53D7;&#x63A7;&#x5236;&#x3002;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x6216;&#x529F;&#x80FD;&#x969C;&#x788D;&#x662F;&#x4E25;&#x91CD;&#x7684;&#x5065;&#x5EB7;&#x95EE;&#x9898;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6838;&#x5FC3;&#x95EE;&#x9898;&#x3002;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x524D;&#x63D0;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E4B;&#x4E00;&#x662F;&#x7EAF;&#x5316;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E3B;&#x8981;&#x5668;&#x5B98;&#x7684;&#x53EF;&#x7528;&#x6027;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x5F88;&#x5BB9;&#x6613;&#x5206;&#x79BB;&#x5916;&#x5468;&#x8840; PMN&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x662F;&#x7531;&#x4E8E;&#x8840;&#x6DB2;&#x4F9B;&#x5E94;&#x6709;&#x9650;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4E0D;&#x592A;&#x9002;&#x5408;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x9AA8;&#x9AD3; (BM) &#x662F;&#x5F88;&#x5BB9;&#x6613;&#x53EF;&#x7528;&#x6C34;&#x5E93;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4ECE; BM &#x83B7;&#x53D6;&#x7EAF;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6709;&#x9650;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x65B0;&#x578B;&#x534F;&#x8BAE;&#x5141;&#x8BB8;&#x7684;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x7EAF;&#x4E0D;&#x53D8;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x79BB;&#x4ECE;&#x5C0F;&#x9F20; BM &#x7531;&#x8D1F;&#x514D;&#x75AB;&#x78C1;&#x73E0;&#x9694;&#x79BB;&#x4F7F;&#x7528;&#x590D;&#x6742;&#x6297;&#x4F53;&#x9E21;&#x5C3E;&#x9152;&#x3002;&#x8BAE;&#x5B9A;&#x4E66; &#x300B; &#x662F;&#x7B80;&#x5355;&#x548C;&#x5FEB;&#x901F; (~ 1 h)&#xFF0C;&#x5177;&#x6709;&#x4EA7;&#x91CF;&#x9AD8; (5-10 * &#x52A8;&#x7269;&#x6BCF; 10&#x2076; &#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;) &#x548C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x7EAF;&#x5EA6;&#x76F8;&#x5F53;&#x4E8E;&#x79EF;&#x6781;&#x9009;&#x62E9; (&gt; 80%&#xFF09;&#x3002;&#x6700;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x83B7;&#x5F97;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x975E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5E76;&#x4FDD;&#x6301;&#x5B8C;&#x5168;&#x529F;&#x80FD;&#x4F53;&#x5916;&#x6216;&#x540E;&#x7EE7;&#x8F6C;&#x8F93;&#x5230;&#x6536;&#x4EF6;&#x4EBA;&#x7684;&#x52A8;&#x7269;&#x3002;&#x6B64;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5E94;&#x8BE5;&#x56E0;&#x6B64;&#x5927;&#x5927;&#x4FBF;&#x5229;&#x4E3B;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

&#x5FEB;&#x901F;&#x514D;&#x75AB;&#x78C1;&#x73E0;&#x8D1F;&#x5BCC;&#x96C6;&#x7684;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x7814;&#x7A76;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x5C0F;&#x9F20;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x3002;

Polymorphonuclear neutrophils (PMN) mediate early immunity to infection but can also cause host damage if their effector functions are not controlled. Their lack or dysfunction is associated with severe health problems and thus the analysis of PMN physiology is a central issue. One prerequisite for PMN analysis is the availability of purified cells from primary organs. While human PMN are easily isolated from peripheral blood, this approach is less suitable for mice due to limited availability of blood. Instead, bone marrow (BM) is an easily available reservoir of murine PMN, but methods to obtain pure cells from BM are limited. We have developed a novel protocol allowing the isolation of highly pure untouched PMN from murine BM by negative immunomagnetic isolation using a complex antibody cocktail. The protocol is simple and fast (~1 h), has a high yield (5-10*10â¶ PMN per animal) and provides a purity of cells equivalent to positive selection (>80%). Most importantly, cells obtained by this method are non-activated and remain fully functional in vitro or after adoptive transfer into recipient animals. This method should thus greatly facilitate the study of primary murine PMN in vitro and in vivo.

Rapid immunomagnetic negative enrichment of neutrophil granulocytes from murine bone marrow for functional studies in vitro and in vivo.

Polynucl&#xE9;aires neutrophiles (PMN) une immunit&#xE9; pr&#xE9;coce &#xE0; l&#x26;#39;infection mais peut &#xE9;galement causer des dommages d&#x26;#39;accueil si leurs fonctions effectrices ne sont pas contr&#xF4;l&#xE9;s. Leur absence ou le dysfonctionnement est associ&#xE9; &#xE0; des probl&#xE8;mes de sant&#xE9; graves et donc l&#x26;#39;analyse de la physiologie PMN est une question centrale. Une condition sine qua non pour l&#x26;#39;analyse PMN est la disponibilit&#xE9; de cellules purifi&#xE9;es &#xE0; partir d&#x26;#39;organes primaires. Alors que l&#x26;#39;homme PMN sont facilement isol&#xE9;es du sang p&#xE9;riph&#xE9;rique, cette approche est moins adapt&#xE9;e pour les souris en raison de la disponibilit&#xE9; limit&#xE9;e de sang. Au lieu de cela, la moelle osseuse (BM) est un r&#xE9;servoir facilement accessible de PMN murin, mais les m&#xE9;thodes pour obtenir des cellules pures de BM sont limit&#xE9;es. Nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; un nouveau protocole permettant l&#x26;#39;isolement des PMN intacte tr&#xE8;s pur &#xE0; partir murin BM par l&#x26;#39;isolement immunomagn&#xE9;tique n&#xE9;gative l&#x26;#39;aide d&#x26;#39;un cocktail d&#x26;#39;anticorps complexe. Le protocole est simple et rapide (~ 1 h), a un rendement &#xE9;lev&#xE9; (5-10 * 10 &#x2076; PMN par animal) et fournit un degr&#xE9; de puret&#xE9; des cellules &#xE9;quivalentes &#xE0; une s&#xE9;lection positive (&#x26;gt; 80%). Plus important encore, des cellules obtenues par cette m&#xE9;thode sont non-actif et restent parfaitement fonctionnels in vitro ou apr&#xE8;s transfert adoptif &#xE0; des animaux b&#xE9;n&#xE9;ficiaires. Cette m&#xE9;thode devrait donc grandement faciliter l&#x26;#39;&#xE9;tude des PMN murin primaire in vitro et in vivo.

Enrichissement rapide immunomagn&#xE9;tique n&#xE9;gative de granulocytes neutrophiles de la moelle osseuse murine pour les &#xE9;tudes fonctionnelles in vitro et in vivo

Neutrophilen Neutrophilen (PMN) fr&uuml;h gegen die Infektion zu vermitteln, sondern k&ouml;nnen auch Host-Sch&auml;den verursachen, wenn ihre Effektor-Funktionen nicht gesteuert werden. Ihre Mangel oder Funktionsst&ouml;rung ist verkn&uuml;pft mit schweren gesundheitlichen Problemen und so die Analyse von PMN Physiologie ist ein zentrales Thema. Eine Voraussetzung f&uuml;r die Analyse von PMN ist die Verf&uuml;gbarkeit von gereinigter Zellen von prim&auml;ren Organe. W&auml;hrend menschliche PMN sind leicht isoliert aus peripherem Blut, ist dieser Ansatz weniger geeignet f&uuml;r M&auml;use aufgrund der begrenzten Verf&uuml;gbarkeit von Blut. Stattdessen Knochenmark (BM) ist eine leicht zug&auml;ngliche Reservoir von murinen PMN, aber reine Zellen von BM erhalten sind beschr&auml;nkt. Wir haben ein neuartiges Protokoll &uuml;ber die Isolierung von hochreinen unber&uuml;hrte PMN von murinen BM von negativen Immunomagnetic-Isolation, die mit einen komplexen Antik&ouml;rper-Cocktail entwickelt. Das Protokoll ist einfach und schnell (~ 1 h), hat eine hohe Rendite (5-10 * 10&#x2076; PMN pro Tier) und bietet eine Reinheit der Zellen entspricht positive Auswahl (&gt; 80 %). Vor allem Zellen, die von dieser Methode sind, nicht aktivierte und bleiben voll funktionsf&auml;hig in Vitro oder nach adoptiven Transfer in Empf&auml;nger Tiere. Diese Methode sollte das Studium der prim&auml;ren murinen PMN in vitro und in vivo somit erheblich erleichtern.

Schnelle Immunomagnetic negative Bereicherung der neutrophile Granulozyten aus murinen Knochenmark f&uuml;r Funktionsstudien in vitro und in vivo.

Neutrofili polimorfonucleati (PMN) mediano primi immunit&agrave; all&#39;infezione, ma possono anche causare il danno per l&#39;ospite se non controllate le loro funzioni effettrici. Loro mancanza o disfunzione &egrave; associata a gravi problemi di salute e quindi l&#39;analisi della fisiologia PMN &egrave; una questione centrale. Un prerequisito per l&#39;analisi PMN &egrave; la disponibilit&agrave; di cellule purificate da organi primari. Mentre PMN umani sono facilmente isolati da sangue periferico, questo approccio &egrave; meno adatto per topi a causa della limitata disponibilit&agrave; di sangue. Invece, midollo osseo (BM) &egrave; un serbatoio facilmente disponibile di PMN murino, ma i metodi per ottenere cellule pure da BM sono limitati. Abbiamo sviluppato un protocollo romanzo consentendo l&#39;isolamento dei PMN altamente pura incontaminata da BM murino da immunomagnetic negativo isolamento utilizzando un cocktail complesso anticorpo. Il protocollo &egrave; semplice e veloce (~ 1 h), ha un&#39;alta resa (5-10 * 10&#x2076; PMN per animale) e fornisce una purezza delle cellule selezione equivalente al positivo (&amp;gt; 80%). Soprattutto, le cellule ottenute con questo metodo sono non attivati e rimangano pienamente funzionale in vitro o dopo trasferimento adottivo in animali destinatari. Questo metodo dovrebbe cos&igrave; notevolmente facilitare lo studio di PMN murino primario in vitro e in vivo.

Immunomagnetic rapido arricchimento negativo dei granulociti neutrofili dal midollo osseo murino per studi funzionali in vitro e in vivo.

&#x591A;&#x5F62;&#x6838;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#xFF08;PMN&#xFF09;&#x306F;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x3078;&#x306E;&#x65E9;&#x671F;&#x514D;&#x75AB;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x6A5F;&#x80FD;&#x304C;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x640D;&#x50B7;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6A5F;&#x80FD;&#x4E0D;&#x5168;&#x306F;&#x6DF1;&#x523B;&#x306A;&#x5065;&#x5EB7;&#x554F;&#x984C;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;PMN&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x304C;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7684;&#x8AB2;&#x984C;&#x3067;&#x3059;&#x3002; PMN&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4E00;&#x3064;&#x306E;&#x524D;&#x63D0;&#x6761;&#x4EF6;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x8981;&#x81D3;&#x5668;&#x304B;&#x3089;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x7CBE;&#x88FD;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30D2;&#x30C8;PMN&#x304C;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x672B;&#x68A2;&#x8840;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x8840;&#x6DB2;&#x306E;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x72B6;&#x6CC1;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306B;&#x306F;&#x3042;&#x307E;&#x308A;&#x9069;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x3001;&#x9AA8;&#x9AC4;&#xFF08;BM&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x30CD;&#x30BA;&#x30DF;&#x306E;PMN&#x306E;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x5165;&#x624B;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x8CAF;&#x6C34;&#x6C60;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x3001;BM&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x7D14;&#x7C8B;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x6297;&#x4F53;&#x30AB;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EB;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x8CA0;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x9694;&#x96E2;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x304B;&#x3089;&#x9AD8;&#x7D14;&#x5EA6;&#x306E;&#x624B;&#x4ED8;&#x304B;&#x305A;&#x306E;PMN&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3067;&#x65E9;&#x3044;&#x306E;&#x304C;&#x7279;&#x9577;&#x3067;&#x3059;&#xFF08;&#x301C;1&#x6642;&#x9593;&#xFF09;&#x3001;&#x9AD8;&#x53CE;&#x7387;&#xFF08;5-10 * 10&#x2076;PMN&#x5F53;&#x305F;&#x308A;&#x306E;&#x52D5;&#x7269;&#xFF09;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x6B63;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#xFF08;&#x26;gt; 80&#xFF05;&#xFF09;&#x306B;&#x76F8;&#x5F53;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D14;&#x5EA6;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x3082;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x975E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;in vitro&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30EC;&#x30B7;&#x30D4;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x52D5;&#x7269;&#x306B;&#x79FB;&#x5165;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x5927;&#x5E45;in vitro&#x304A;&#x3088;&#x3073;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;PMN&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x3079;&#x304D;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;

in vitro&#x304A;&#x3088;&#x3073;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x9846;&#x7C92;&#x7403;&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x514D;&#x75AB;&#x8CA0;&#x306E;&#x6FC3;&#x7E2E;

Polymorphonuclear neutrophils (PMN) &#xAC10;&#xC5FC; &#xCD08;&#xAE30; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC911;&#xC7AC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC190;&#xC0C1; &#xB420; &#xB610;&#xD55C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; effector &#xAE30;&#xB2A5; &#xC81C;&#xC5B4; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBD80;&#xC871; &#xB610;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC7A5;&#xC560;&#xB294; &#xC2EC;&#xAC01;&#xD55C; &#xAC74;&#xAC15; &#xBB38;&#xC81C;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C;&#xB97C; PMN &#xC0DD;&#xB9AC;&#xD559;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xC911;&#xC2EC; &#xBB38;&#xC81C;&#xB294;. PMN &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC804;&#xC81C; &#xC870;&#xAC74; 1 &#xAE30;&#xAD00;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC21C;&#xD654; &#xB41C; &#xC140;&#xC758; &#xAC00;&#xC6A9;&#xC131; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC778;&#xAC04;&#xC758; PMN &#xB9D0; &#xCD08; &#xD608;&#xC561;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC27D;&#xAC8C; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB418;&#xC5B4;,&#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xC0DD;&#xC950; &#xD608;&#xC561;&#xC758; &#xD55C;&#xC815; &#xB41C; &#xAC00;&#xC6A9;&#xC131; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xB35C; &#xC801;&#xD569; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC2E0;, &#xACE8; &#xC218; (BM) murine PMN&#xC758; &#xC27D;&#xAC8C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC800;&#xC218;&#xC9C0; &#xC774;&#xC9C0;&#xB9CC; BM&#xC5D0;&#xC11C; &#xC21C;&#xC218;&#xD55C; &#xC140;&#xC744; &#xAC00;&#xC838;&#xC624;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC81C;&#xD55C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD56D; &#xCCB4; &#xCE75;&#xD14C;&#xC77C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; immunomagnetic &#xACA9;&#xB9AC; &#xD558; &#xC5EC; murine BM&#xC5D0;&#xC11C; &#xB192;&#xC740; &#xC21C;&#xC218; &#xC628;&#xC804;&#xD788; PMN&#xC758; &#xACA9;&#xB9AC; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC740; &#xAC04;&#xB2E8; &#xD558; &#xACE0; &#xBE60;&#xB978; (~ 1 h)&#xB294; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC728; (5-10 * 10&#x2076; PMN &#xB3D9;&#xBB3C; &#xB2F9;) &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xB3D9;&#xC77C; &#xC120;&#xD0DD;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xC140;&#xC758; &#xC21C; &#xACB0; &#xD558; &#xACE0; (&amp;gt; 80%). &#xAC00;&#xC7A5; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;,&#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5BB;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC; &#xBE44; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558; &#xACE0; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xAD00; &#xB610;&#xB294; &#xBC1B;&#xB294; &#xC0AC;&#xB78C; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC785;&#xC591; &#xC804;&#xC1A1; &#xD6C4; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD558; &#xAC8C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0;. &#xC774; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB294; &#xAE30;&#xBCF8; murine PMN &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xCD09;&#xC9C4; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xD55C;&#xB2E4;.

&#xBE60;&#xB978; immunomagnetic &#xD638; granulocytes &#xAE30;&#xB2A5; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; murine &#xACE8; &#xC218;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xB18D;&#xCD95;.

Los neutr&#xF3;filos polimorfonucleares (PMN) median la inmunidad a la infecci&#xF3;n temprana, pero tambi&#xE9;n puede causar da&#xF1;o al hu&#xE9;sped, si sus funciones efectoras no est&#xE1;n controlados. Su falta o disfunci&#xF3;n est&#xE1; asociada con graves problemas de salud y por lo tanto el an&#xE1;lisis de la fisiolog&#xED;a de PMN es un tema central. Un requisito previo para el an&#xE1;lisis de los PMN es la disponibilidad de purificada c&#xE9;lulas de &#xF3;rganos primarios. Mientras que los PMN humanos son f&#xE1;cilmente aislado de la sangre perif&#xE9;rica, este enfoque es menos adecuado para ratones debido a la limitada disponibilidad de sangre. En cambio, la m&#xE9;dula &#xF3;sea (MO) es un dep&#xF3;sito de f&#xE1;cil acceso de los PMN murino, pero los m&#xE9;todos para obtener c&#xE9;lulas puras de BM son limitadas. Hemos desarrollado un nuevo protocolo que permite el aislamiento de los PMN virgen de alta pureza a partir de murino BM por aislamiento negativo inmunomagn&#xE9;tica utilizando un c&#xF3;ctel de anticuerpos complejo. El protocolo es sencillo y r&#xE1;pido (~ 1 h), tiene un alto rendimiento (5.10 * 10 $ &#x2076; $ PMN por animal) y proporciona una pureza de c&#xE9;lulas equivalente a la selecci&#xF3;n positiva (&#x26;gt; 80%). M&#xE1;s importante a&#xFA;n, las c&#xE9;lulas obtenidas por este m&#xE9;todo no son activados y permanecen completamente funcional in vitro o despu&#xE9;s de la transferencia adoptiva en animales receptores. Este m&#xE9;todo por lo tanto deber&#xED;a facilitar enormemente el estudio de los PMN primaria murino in vitro e in vivo.

R&#xE1;pido Enriquecimiento inmunomagn&#xE9;tica negativa de los granulocitos neutr&#xF3;filos de la m&#xE9;dula &#xF3;sea murina para estudios funcionales in vitro e in vivo

Transgenic mice expressing fluorescent proteins in specific cell populations are widely used for the study of in vivo behavior of these cells. We have recently reported that uterine mast cells (uMCs) are important for implantation and placentation. However, their in vivo localization in uterus before and during pregnancy is unknown. Herein, we report the direct observation of uMCs in vivo using double-transgenic C57BL/6J Mcpt5-Cre ROSA26-EYFP mice with high expression of enhanced yellow fluorescent protein in MC protease 5 (Cma1 (Mcpt5))-expressing cells by intravital two-photon microscopy. We were able to monitor MCs live in utero during the murine estrous cycle and at different days of pregnancy. We demonstrated that uMCs accumulated during the receptive phase of the female (estrus) and persisted in large numbers at early pregnancy stages and around mid-gestation and declined in number in non-pregnant animals at diestrus. This intravital microscopy technique, including a custom-made microscope stage and the adaption of the surgical procedure, allowed the access of the uterus and implantations for imaging. The introduced application of intravital microscopy to C57BL/6J-Mcpt5-Cre ROSA26-EYFP mice offers a novel and powerful in vivo approach to further address the evident relevance of uMCs to reproductive processes with obvious clinical implications.

In vivo visualization of uterine mast cells by two-photon microscopy.

Neuronal injury from ischemic stroke is aggravated by invading peripheral immune cells. Early infiltrates of neutrophil granulocytes and T-cells influence the outcome of stroke. So far, however, neither the timing nor the cellular dynamics of neutrophil entry, its consequences for the invaded brain area, or the relative importance of T-cells has been extensively studied in an intravital setting. Here, we have used intravital two-photon microscopy to document neutrophils and brain-resident microglia in mice after induction of experimental stroke. We demonstrated that neutrophils immediately rolled, firmly adhered, and transmigrated at sites of endothelial activation in stroke-affected brain areas. The ensuing neutrophil invasion was associated with local blood-brain barrier breakdown and infarct formation. Brain-resident microglia recognized both endothelial damage and neutrophil invasion. In a cooperative manner, they formed cytoplasmic processes to physically shield activated endothelia and trap infiltrating neutrophils. Interestingly, the systemic blockade of very-late-antigen-4 immediately and very effectively inhibited the endothelial interaction and brain entry of neutrophils. This treatment thereby strongly reduced the ischemic tissue injury and effectively protected the mice from stroke-associated behavioral impairment. Behavioral preservation was also equally well achieved with the antibody-mediated depletion of myeloid cells or specifically neutrophils. In contrast, T-cell depletion more effectively reduced the infarct volume without improving the behavioral performance. Thus, neutrophil invasion of the ischemic brain is rapid, massive, and a key mediator of functional impairment, while peripheral T-cells promote brain damage. Acutely depleting T-cells and inhibiting brain infiltration of neutrophils might, therefore, be a powerful early stroke treatment.

Very-late-antigen-4 (VLA-4)-mediated brain invasion by neutrophils leads to interactions with microglia, increased ischemic injury and impaired behavior in experimental stroke.

Cerebral toxoplasmosis is characterized by activation of brain resident cells and recruitment of specific immune cell subsets from the periphery to the central nervous system (CNS). Our studies revealed that the rapidly invaded Ly6G(+) neutrophil granulocytes are an early non-lymphoid source of interferon-gamma (IFN-γ), the cytokine known to be the major mediator of host resistance to Toxoplasma gondii (T. gondii). Upon selective depletion of Ly6G(+) neutrophils, we detected reduced IFN-γ production and increased parasite burden in the CNS. Ablation of Ly6G(+) cells resulted in diminished recruitment of Ly6C(hi) monocytes into the CNS, indicating a pronounced interplay. Additionally, we identified infiltrated Ly6G(+) neutrophils to be a heterogeneous population. The Ly6G(+)CD62-L(hi)CXCR4(+) subset released cathelicidin-related antimicrobial peptide (CRAMP), which can promote monocyte dynamics. On the other hand, the Ly6G(+)CD62-L(lo)CXCR4(+) subset produced IFN-γ to establish early inflammatory response. Collectively, our findings revealed that the recruited Ly6G(+)CXCR4(+) neutrophil granulocytes display a heterogeneity in the CNS with a repertoire of effector functions crucial in parasite control and immune regulation upon experimental cerebral toxoplasmosis.

Monika Riek-Burchardt

Institute of Molecular and Clinical Immunology

University of Magdeburg

Intravital Microscopy of Monocyte Homing and Tumor-Related Angiogenesis in a Murine Model of Peripheral Arterial Disease