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Laser-assisted Lentiviral Gene Delivery to Mouse Fertilized Eggs

Lentiviruses are efficient vectors for gene delivery to mammalian cells. Following transduction, the lentiviral genome is stably incorporated into the ...

National Institute of Environmental Health Sciences

&#x53D7;&#x4F53;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176; (RTKs) &#x662F;&#x6B63;&#x5E38;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x3001; &#x5206;&#x5316;&#x3001; &#x548C;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5B83;&#x4EEC;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x5404;&#x79CD;&#x75C5;&#x7406;&#x6761;&#x4EF6;&#x65F6;&#x4E2D;&#x65AD;&#x3002;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684; RTKs &#x523A;&#x6FC0;&#x8FC7;&#x591A;&#x7684;&#x9014;&#x5F84;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x6CDB;&#x7D20;&#x5316;&#x548C;&#x53D7;&#x4F53;&#x672C;&#x8EAB;&#x7684;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x541E;&#x7EC8;&#x6B62; RTK &#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x5B83;&#x5DF2;&#x6210;&#x4E3A; RTK &#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5FC5;&#x8981;&#x6B65;&#x9AA4;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; intersectin &#xFF08;ITSN&#xFF09; &#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x541E;&#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x914D;&#x5408;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53; (EGFR) &#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x53CA;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x8C03;&#x63A7;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;ITSN &#x548C;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x751F;&#x5316;&#x94FE;&#x63A5;&#x672A;&#x5B9A;&#x4E49;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA; ITSN &#x662F;&#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x7684; E3 &#x6CDB;&#x7D20;&#x8FDE;&#x63A5;&#x9176; Cbl&#x3002; ITSN &#x5F62;&#x5F0F;&#x590D;&#x6742;&#x4E0E; Cbl &#x4F53;&#x5185;&#x4ECB;&#x5BFC; Src &#x540C;&#x6E90; (SH) 3 &#x57DF;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; Cbl &#x7684; Pro-rich &#x4E8C;&#x7518;&#x9187;&#x7684;&#x603B;&#x7AD9;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x6CDB;&#x7D20;&#x5316;&#x548C;&#x964D;&#x89E3;&#x7684;&#x6D3B;&#x5316;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x7531; RNA &#x5E72;&#x6270;&#x6C89;&#x9ED8; ITSN &#x51CF;&#x6BD2; EGFR &#x5185;&#x5316;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8C03;&#x8282; kinasemitogen &#x6D3B;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x901A;&#x8DEF;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x8868;&#x660E;&#x5728; EGFR &#x51FD;&#x6570; ITSN &#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3002;&#x9274;&#x4E8E; ITSN &#x548C;&#x989D;&#x5916;&#x7684; RTKs &#x4E4B;&#x95F4;&#x4F9D;&#x4ECE;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x6307;&#x5411;&#x91CD;&#x8981;&#x8FDB;&#x5316;&#x4FDD;&#x5B88;&#x3001; &#x76D1;&#x7BA1;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E3A; ITSN RTK &#x529F;&#x80FD;&#x6240;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x53D7;&#x4F53;&#x4FE1;&#x53F7;&#x6700;&#x7EC8;&#x7EC8;&#x6B62;&#x3002;

Intersectin &#x8C03;&#x8282;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53;&#x80DE;&#x541E;&#x3001; &#x6CDB;&#x7D20;&#x5316;&#xFF0C;&#x548C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;

Receptor tyrosine kinases (RTKs) are critical for normal cell growth, differentiation, and development, but they contribute to various pathological conditions when disrupted. Activation of RTKs stimulates a plethora of pathways, including the ubiquitylation and endocytosis of the receptor itself. Although endocytosis terminates RTK signaling, it has emerged as a requisite step in RTK activation of signaling pathways. We have discovered that the endocytic scaffolding protein intersectin (ITSN) cooperated with epidermal growth factor receptor (EGFR) in the regulation of cell growth and signaling. However, a biochemical link between ITSN and EGFR was not defined. In this study, we demonstrate that ITSN is a scaffold for the E3 ubiquitin ligase Cbl. ITSN forms a complex with Cbl in vivo mediated by the Src homology (SH) 3 domains binding to the Pro-rich COOH terminus of Cbl. This interaction stimulates the ubiquitylation and degradation of the activated EGFR. Furthermore, silencing ITSN by RNA interference attenuated EGFR internalization as well as activation of the extracellular signal-regulated kinasemitogen-activated protein kinase pathway, thereby demonstrating the importance of ITSN in EGFR function. Given the cooperativity between ITSN and additional RTKs, these results point to an important evolutionarily conserved, regulatory role for ITSN in RTK function that is necessary for both signaling from receptors as well as the ultimate termination of receptor signaling.

Intersectin regulates epidermal growth factor receptor endocytosis, ubiquitylation, and signaling.

R&#xE9;cepteurs tyrosine kinases (RTK) sont critiques pour la croissance cellulaire normale, la diff&#xE9;renciation et le d&#xE9;veloppement, mais ils contribuent &#xE0; diverses conditions pathologiques o&#xF9; perturb&#xE9;. Activation des RTK stimule une pl&#xE9;thore de voies, y compris le ubiquitylation et l&#x26;#39;endocytose du r&#xE9;cepteur lui-m&#xEA;me. Bien que l&#x26;#39;endocytose se termine RTK signalisation, il est apparu comme une &#xE9;tape incontournable dans l&#x26;#39;activation des voies de signalisation RTK. Nous avons d&#xE9;couvert que le intersectine &#xE9;chafaudages endocytose des prot&#xE9;ines (ITSN) ont coop&#xE9;r&#xE9; avec le r&#xE9;cepteur du facteur de croissance &#xE9;pidermique (EGFR) dans la r&#xE9;gulation de la croissance cellulaire et la signalisation. Cependant, un lien biochimique entre ITSN et EGFR n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;fini. Dans cette &#xE9;tude, nous d&#xE9;montrons que ITSN est un &#xE9;chafaudage pour la Cbl ubiquitine ligase E3. ITSN forme un complexe avec Cbl in vivo m&#xE9;di&#xE9;e par l&#x26;#39;homologie Src (SH) 3 domaines de liaison &#xE0; l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; COOH-terminale Pro-riche Cbl. Cette interaction stimule la ubiquitylation et la d&#xE9;gradation de l&#x26;#39;EGFR activ&#xE9;. En outre, faire taire ITSN par ARN interf&#xE9;rence internalisation att&#xE9;nu&#xE9; EGFR ainsi que l&#x26;#39;activation de l&#x26;#39;extracellular signal-regulated kinasemitogen activ&#xE9; voie prot&#xE9;ine kinase, ce qui d&#xE9;montre l&#x26;#39;importance de ITSN en fonction EGFR. Compte tenu de la coop&#xE9;rativit&#xE9; entre ITSN et RTK suppl&#xE9;mentaires, ces r&#xE9;sultats indiquent une importante &#xE9;volutivement conserv&#xE9;e, le r&#xF4;le de r&#xE9;glementation pour ITSN en fonction RTK qui est n&#xE9;cessaire &#xE0; la fois pour la signalisation des r&#xE9;cepteurs ainsi que la cessation d&#xE9;finitive de la signalisation des r&#xE9;cepteurs.

Intersectine R&#xE9;gule &#xE9;pidermique endocytose Growth Factor Receptor, ubiquitylation, et de la signalisation

Rezeptor-Tyrosin-Kinasen (RTKs) sind entscheidend f&uuml;r die normale Zelle Wachstum, Differenzierung und Entwicklung, aber sie tragen zu verschiedenen pathologischen Bedingungen wenn gest&ouml;rt. Aktivierung des RTKs stimuliert eine F&uuml;lle von Optionen, einschlie&szlig;lich der Ubiquitylation und der Endozytose des Rezeptors selbst. Obwohl Endozytose RTK Signalisierung k&uuml;ndigt, hat sich als notwendigen Schritt in RTK-Aktivierung der Signalwege herausgestellt. Wir haben entdeckt, dass das endocytic Ger&uuml;st-Protein intersectin (ITSN) mit epidermalen Wachstumsfaktor-Rezeptor (EGFR) an der Regulierung des Zellwachstums und Signalisierung zusammengearbeitet. Eine biochemische Verbindung zwischen ITSN und EGFR wurde jedoch nicht definiert. In dieser Studie zeigen wir, dass ITSN, dass ein Ger&uuml;st ist f&uuml;r die E3 Ubiquitin Ligase Cbl. ITSN einen Komplex mit Cbl in-vivo bildet durch die Src-Homologie (SH) 3 Bereiche binden an die Pro-rich-COOH-Endstation der Cbl vermittelt. Diese Interaktion stimuliert die Ubiquitylation und den Abbau des aktivierten EGFR. Dar&uuml;ber hinaus vermindert Unterdr&uuml;ckender ITSN von RNA-Interferenz EGFR Internalisierung sowie die Aktivierung des extrazellul&auml;re Signal-regulierten Kinasemitogen aktivierte Protein-Kinase Signalweges, demonstrieren und damit die Bedeutung der ITSN im EGFR-Funktion. Angesichts der Kooperativit&auml;t ITSN bis zus&auml;tzliche RTKs, verweisen diese Ergebnisse auf eine evolution&auml;r konservierte, regulatorische Rolle f&uuml;r ITSN in RTK-Funktion, die f&uuml;r beide Signalisierung von Rezeptoren sowie die ultimative K&uuml;ndigung Rezeptor signalisieren notwendig.

Intersectin regelt die epidermalen Wachstumsfaktor-Rezeptor Endozytose und Ubiquitylation signalisieren.

Recettore tirosina chinasi (RTKs) sono critiche per la crescita delle cellule normali, differenziazione e lo sviluppo, ma contribuiscono a diverse condizioni patologiche quando perturbato. Attivazione di RTKs stimola una pletora di percorsi, tra cui il ubiquitylation ed endocitosi del recettore stesso. Sebbene endocitosi termina RTK di segnalazione, &egrave; emerso come un passo sufficientemente in attivazione RTK di segnalazione percorsi. Abbiamo scoperto che la proteina endocitico ponteggi intersectin (ITSN) hanno collaborato con epidermal growth factor receptor (EGFR) nella regolazione della crescita cellulare e di segnalazione. Tuttavia, non &egrave; stato definito un legame biochimico tra ITSN ed EGFR. In questo studio, dimostreremo che ITSN &egrave; che un&#39;impalcatura per l&#39;E3 ubiquitina ligasi Cbl. ITSN forma un complesso con Cbl in vivo mediata dalla omologia Src (SH) 3 domini vincolante al capolinea della Cbl Pro-rich COOH. Questa interazione stimola la ubiquitylation e la degradazione dell&#39;EGFR attivati. Inoltre, mettendo a tacere ITSN di interferenza del RNA attenuato interiorizzazione di EGFR come attivazione del percorso segnale-regolata extracellulare attivato kinasemitogen proteina chinasi, dimostrando cos&igrave; l&#39;importanza di ITSN in funzione di EGFR. Data la cooperativit&agrave; tra ITSN e RTKs supplementari, questi risultati punto per un ruolo importante evolutivamente conservato, regolamentazione per ITSN in funzione RTK che &egrave; necessario per entrambi segnalazione da recettori, nonch&eacute; la cessazione definitiva di segnalazione del ricevitore.

Intersectin regola endocitosi di epidermal growth factor receptor, ubiquitylation e segnalazione.

&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;RTK&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x3001;&#x5206;&#x5316;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x4E2D;&#x65AD;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x75C5;&#x7684;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; RTK&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x81EA;&#x4F53;&#x306E;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x5316;&#x3068;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;RTK&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x7D42;&#x4E86;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;RTK&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6D6E;&#x4E0A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x8DB3;&#x5834;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;intersectin&#xFF08;ITSN&#xFF09;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3068;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4E0A;&#x76AE;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;EGFR&#xFF09;&#x3068;&#x5354;&#x529B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;ITSN&#x3068;EGFR&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x304C;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;ITSN&#x306F;E3&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x30BC;Cbl&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8DB3;&#x5834;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; ITSN&#x306F;Cbl&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x306E;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;COOH&#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;Src&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC;&#xFF08;SH&#xFF09;3&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;in vivo&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;Cbl&#x306E;&#x3068;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;EGFR&#x306E;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x5316;&#x3068;&#x5206;&#x89E3;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x200B;&#x200B;&#x679C;&#x3001;EGFR&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3067;ITSN&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;RNA&#x5E72;&#x6E09;&#x6E1B;&#x8870;EGFR&#x306E;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x8ABF;&#x7BC0;kinasemitogen&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;ITSN&#x3092;&#x9ED9;&#x3089;&#x305B;&#x305F;&#x3002; ITSN&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x5354;&#x540C;&#x6027;&#x3092;&#x8003;&#x3048;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x7A76;&#x6975;&#x306E;&#x7D42;&#x4E86;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;RTK&#x95A2;&#x6570;&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;ITSN&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x9032;&#x5316;&#x7684;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6307;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Intersectin&#x306F;&#x3001;&#x4E0A;&#x76AE;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3001;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x5316;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;

&#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; tyrosine kinases (RTKs)&#xB294; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC7A5;, &#xBD84;&#xD654;, &#xBC0F; &#xAC1C;&#xBC1C;, &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC911;&#xB2E8; &#xB420; &#xB54C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBCD1; &#xC801;&#xC778; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB97C;. Rtks&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xACBD;&#xB85C;, ubiquitylation &#xB4F1; &#xC790;&#xCCB4; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; endocytosis &#xACFC;&#xB2E4; &#xC790;&#xADF9;. &#xBE44;&#xB85D; endocytosis RTK &#xC2E0;&#xD638; &#xC885;&#xB8CC;, &#xC2E0;&#xD638; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; RTK &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB85C; &#xB5A0;&#xC624;&#xB974;&#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD45C; &#xD53C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (EGFR)&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC7A5; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xD638; &#xADDC;&#xC815;&#xC5D0; &#xD611;&#xB825; (ITSN) intersectin endocytic &#xBE44; &#xACC4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; ITSN&#xC640; EGFR &#xC0AC;&#xC774; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xC5F0;&#xACB0; &#xC815;&#xC758; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; ITSN&#xC744; &#xBE44; &#xACC4; E3 &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xB9AC;&#xAC00; Cbl. ITSN Cbl vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD615;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC7AC; Src homology (SH) Cbl&#xC758; Pro-rich COOH &#xC885;&#xC810;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; 3 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC740; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC790;&#xADF9; ubiquitylation&#xC640; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; EGFR&#xC758; &#xC800;&#xD558;. &#xB610;&#xD55C;, RNA &#xAC04;&#xC12D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; ITSN &#xC785;&#xC744; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; EGFR &#xD568;&#xC218;&#xC5D0;&#xC11C; ITSN&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xC785;&#xC99D; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xC2E0;&#xD638; &#xADDC;&#xC81C; kinasemitogen &#xD65C;&#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB85C; EGFR &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654; &#xAC10;&#xC1E0;. ITSN&#xACFC; &#xCD94;&#xAC00; RTKs &#xC0AC;&#xC774; cooperativity&#xB97C; &#xAC10;&#xC548;&#xD560; &#xB54C;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC;&#xB97C; &#xAC00;&#xB9AC;&#xD0A8; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC9C4;&#xD654; &#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC874;, &#xADDC;&#xC81C; &#xC5ED;&#xD560; ITSN&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC2E0;&#xD638;&#xC758; &#xAD81;&#xADF9;&#xC801;&#xC778; &#xC885;&#xB8CC;&#xC640; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB450; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; RTK &#xD568;&#xC218;&#xC5D0;.

Intersectin &#xD45C; &#xD53C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; endocytosis, ubiquitylation, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC2E0;&#xD638; &#xC870;&#xC808;.

Los receptores tirosina quinasa (RTK) son fundamentales para el crecimiento celular normal, la diferenciaci&#xF3;n y el desarrollo, pero que contribuyen a diversas condiciones patol&#xF3;gicas cuando se encuentra perturbada. La activaci&#xF3;n de RTK estimula una pl&#xE9;tora de v&#xED;as, incluyendo la ubiquitinaci&#xF3;n y la endocitosis del propio receptor. A pesar de la endocitosis termina Derecho a Saber de se&#xF1;alizaci&#xF3;n, que se ha convertido en un paso necesario en la activaci&#xF3;n de RTK de v&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n. Hemos descubierto que la prote&#xED;na de andamiaje intersectin endoc&#xED;tica (ITSN) colabor&#xF3; &#x200B;&#x200B;con el receptor de factor de crecimiento epid&#xE9;rmico (EGFR) en la regulaci&#xF3;n del crecimiento celular y la se&#xF1;alizaci&#xF3;n. Sin embargo, una relaci&#xF3;n bioqu&#xED;mica entre ITSN y EGFR no se ha definido. En este estudio, se demuestra que ITSN es un andamio para la Cbl ubiquitina ligasa E3. ITSN forma un complejo con Cbl in vivo mediada por la homolog&#xED;a Src (SH) 3 dominios de uni&#xF3;n al extremo COOH favor de los ricos de CBL. Esta interacci&#xF3;n estimula la ubiquitinaci&#xF3;n y la degradaci&#xF3;n del EGFR activado. Por otra parte, el silenciamiento por ARN ITSN internalizaci&#xF3;n de interferencia atenuada EGFR, as&#xED; como la activaci&#xF3;n de la se&#xF1;al extracelular regulada kinasemitogen activado por v&#xED;a de la prote&#xED;na quinasa, lo que demuestra la importancia de ITSN en funci&#xF3;n del EGFR. Dada la cooperatividad entre ITSN y RTK adicionales, estos resultados apuntan a un importante conservado evolutivamente, el papel regulador de las ITSN en funci&#xF3;n RTK que es necesario tanto para la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de los receptores, as&#xED; como la terminaci&#xF3;n definitiva de la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de los receptores.

Intersectin Regula factor de crecimiento epid&#xE9;rmico endocitosis del receptor, Ubiquitylation, y se&#xF1;alizaci&#xF3;n

Huntingon &#x7684;&#x75BE;&#x75C5;&#x662F;&#x56E0;&#x6269;&#x5927;&#x5BFC;&#x81F4;&#x805A;&#x5408;&#x6210;&#x6838;&#x548C;/&#x6216;&#x6E38;&#x79BB;&#x5305;&#x88F9;&#x4F53;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7A81;&#x53D8; Htt &#x86CB;&#x767D; huntingtin (Htt) polyglutamine (polyQ) &#x4E00;&#x5757;&#x9010;&#x6B65;&#x795E;&#x7ECF;&#x9000;&#x884C;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x3002;&#x7A81;&#x53D8; Htt &#x5F71;&#x54CD;&#x591A;&#x4E2A;&#x6D41;&#x7A0B;&#x5305;&#x62EC;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x964D;&#x89E3;&#x3001; &#x8F6C;&#x5F55;&#x3001; &#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x3001; &#x5FEB;&#x901F;&#x8F74;&#x7A81;&#x8FD0;&#x8F93;&#x548C;&#x5185;&#x541E; [&#x5BA1;&#x67E5;&#x5728;&#x7F57;&#x65AF;&#xFF0C;&#x5B89;&#x5FB7;&#x68EE;&#x548C;&#x5185;&#xFF0C;&#x7855;&#x58EB;&#x5B66;&#x4F4D; &#xFF08;2005 &#x5E74;&#xFF09; &#x8BA4;&#x4E3A;&#xFF1A; &#x5728;&#x795E;&#x7ECF;&#x53D8;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x805A;&#x96C6;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x4EC0;&#x4E48;&#xFF1F;Nat&#x3002; &#x4FEE;&#x8BA2;&#x7248; Mol.&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;Biol.6&#x3001; 891-898]&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x541E;&#x548C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x811A;&#x624B;&#x67B6; intersectin (ITSN) &#x589E;&#x52A0;&#x805A;&#x5408;&#x5F62;&#x6210;&#x7684; c-Jun-NH 2 &#x7EC8;&#x7AEF;&#x6FC0;&#x9176; (JNK) &#x6FC0;&#x6D3B;&#x901A;&#x8FC7;&#x7A81;&#x53D8; Htt-mapk &#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x6C89;&#x9ED8; ITSN &#x6216;&#x6291;&#x5236; JNK &#x51CF;&#x6BD2;&#x805A;&#x5408;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x5229;&#x7528;&#x679C;&#x8747;&#x6A21;&#x578B;&#x5BF9; polyQ &#x91CD;&#x590D;&#x75BE;&#x75C5;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230; ITSN &#x589E;&#x5F3A; polyQ &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x6BD2;&#x6027;&#x3002;&#x4E92;&#x60E0;&#x5173;&#x7CFB;&#x6709;&#x4EBA; ITSN &#x548C; Htt &#x4E4B;&#x95F4;&#x3002;ITSN &#x52A0;&#x5F3A; Htt &#x805A;&#x5408;&#x548C;&#x6BD2;&#x6027;&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6; Htt&#xFF0C;&#x53CD;&#x8FC7;&#x6765;&#xFF0C;&#x6291;&#x5236; ITSN &#x548C;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x4E4B;&#x95F4;&#x4F9D;&#x4ECE;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6CE8;&#x610F;&#x5230; ITSN &#x9AD8;&#x6548;&#x8868;&#x8FBE;&#x589E;&#x5F3A;&#x805A;&#x5408; polyQ &#x6269;&#x5927;&#x96C4;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53; (AR) &#x548C;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7248;&#x672C; Htt &#x548C; AR &#x6697;&#x793A; ITSN &#x901A;&#x8FC7; polyQ &#x542B;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x9000;&#x884C;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x53C2;&#x4E0E;&#x3002;

Intersectin &#x589E;&#x5F3A;&#x4E86; huntingtin &#x805A;&#x5408;&#x548C;&#x901A;&#x8FC7; c Jun NH2 &#x672B;&#x7AEF;&#x6FC0;&#x9176;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x795E;&#x7ECF;&#x53D8;&#x6027;&#x3002;

Huntingon's disease is a progressive neurodegenerative disease arising from expansion of a polyglutamine (polyQ) tract in the protein huntingtin (Htt) resulting in aggregation of mutant Htt into nuclear and/or cytosolic inclusions in neurons. Mutant Htt affects multiple processes including protein degradation, transcription, signal transduction, fast axonal transport and endocytosis [reviewed in Ross, C.A. and Poirier, M.A. (2005) Opinion: what is the role of protein aggregation in neurodegeneration? Nat. Rev. Mol. Cell. Biol., 6, 891-898]. Here, we report that the endocytic and signal transduction scaffold intersectin (ITSN) increased aggregate formation by mutant Htt through activation of the c-Jun-NH(2)-terminal kinase (JNK)-MAPK pathway. Conversely, silencing ITSN or inhibiting JNK attenuated aggregate formation. Using a Drosophila model for polyQ repeat disease, we observed that ITSN enhanced polyQ-mediated neurotoxicity. A reciprocal relationship was observed between ITSN and Htt. While ITSN enhanced Htt aggregation and toxicity, Htt, in turn, inhibited the cooperativity between ITSN and the epidermal growth factor receptor signal transduction pathway. Finally, we observed that ITSN overexpression enhanced aggregation of polyQ-expanded androgen receptor (AR) as well as wild-type versions of both Htt and AR suggesting a broader involvement of ITSN in neurodegenerative diseases through destabilization of polyQ-containing proteins.

Intersectin enhances huntingtin aggregation and neurodegeneration through activation of c-Jun-NH2-terminal kinase.

La maladie Huntingon est une maladie neurod&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;rative progressive r&#xE9;sultant de l&#x26;#39;expansion d&#x26;#39;une polyglutamine (polyQ) des voies dans la prot&#xE9;ine (Htt) huntingtine r&#xE9;sultant de l&#x26;#39;agr&#xE9;gation d&#x26;#39;un mutant de Htt en inclusions nucl&#xE9;aires et / ou cytosolique dans les neurones. Mutant Htt affecte plusieurs processus, y compris la d&#xE9;gradation des prot&#xE9;ines, la transcription, la transduction du signal, transport axonal rapide et l&#x26;#39;endocytose [examin&#xE9; dans l&#x26;#39;arr&#xEA;t Ross, CA et Poirier, MA (2005) Avis: quel est le r&#xF4;le de l&#x26;#39;agr&#xE9;gation des prot&#xE9;ines dans la neurod&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;rescence? Nat. Rev Mol. Cell. Biol., 6, 891-898]. Ici, nous d&#xE9;clarons que l&#x26;#39;endocytose et la transduction du signal &#xE9;chafaudage intersectine (ITSN) a augment&#xE9; la formation d&#x26;#39;agr&#xE9;gats par HTT mutant par l&#x26;#39;activation de la c-Jun-NH (2)-terminal kinase (JNK)-MAPK. A l&#x26;#39;inverse, faire taire ITSN ou inhiber la formation de JNK global att&#xE9;nu&#xE9;. En utilisant un mod&#xE8;le de drosophile pour la maladie de r&#xE9;p&#xE9;tition polyQ, nous avons observ&#xE9; que ITSN renforc&#xE9;e polyQ-neurotoxicit&#xE9;. Une relation r&#xE9;ciproque a &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;e entre ITSN et Htt. Alors que ITSN renforc&#xE9;e Htt l&#x26;#39;agr&#xE9;gation et la toxicit&#xE9;, Htt, &#xE0; son tour, inhibe la coop&#xE9;rativit&#xE9; entre ITSN et le facteur de croissance &#xE9;pidermique voie de transduction du signal. Enfin, nous avons observ&#xE9; que l&#x26;#39;agr&#xE9;gation ITSN surexpression am&#xE9;lior&#xE9;e de polyQ-expans&#xE9; r&#xE9;cepteur des androg&#xE8;nes (AR) ainsi que de type sauvage &#xE0; la fois les versions de Htt et AR sugg&#xE9;rant une plus large participation des ITSN dans les maladies neurod&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ratives &#xE0; travers la d&#xE9;stabilisation de polyQ contenant des prot&#xE9;ines.

Intersectine Am&#xE9;liore agr&#xE9;gation huntingtine et neurod&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;rescence par l&#x26;#39;activation de C-Jun-NH2-terminale kinase

Huntingon Krankheit ist eine progressive Neurodegenerative Erkrankung, die durch Ausbau der eine bei Polyglutamin (PolyQ)-Darm-Trakt in der Protein-Chorea Huntington (Htt) die Aggregation der Mutant Htt in nuklearen und/oder Zytosolische Einschl&uuml;ssen in Neuronen. Mutant Htt betrifft mehrere Prozesse einschlie&szlig;lich Proteinabbau, Transkription, Signaltransduktion, schnell axonale Transport und Endozytose [&uuml;berpr&uuml;ft in Ross, C.A. und Poirier, M.A. (2005)-Stellungnahme: Was ist die Rolle der Proteinanh&auml;ufung in Neurodegeneration? Nat Rev. Mol Cell. Biol., 6, 891-898]. Hier berichten wir, dass die endocytic und Signal-Transduktion Ger&uuml;st intersectin (ITSN) aggregieren Bildung von Mutant Htt durch Aktivierung der c-Jun-NH 2-Terminal kinase (JNK) erh&ouml;ht-MAPK Weg. Umgekehrt vermindert Unterdr&uuml;ckender ITSN oder Hemmung JNK Aggregat Bildung. Mit einem Drosophila-Modell f&uuml;r PolyQ wiederholen Krankheit, beobachteten wir, dass ITSN PolyQ-vermittelte Neurotoxizit&auml;t verbessert. Eine reziproke Beziehung wurde zwischen ITSN und Htt beobachtet. W&auml;hrend ITSN Htt-Aggregation und Toxizit&auml;t gesteigert, hemmte Htt, wiederum die Kooperativit&auml;t ITSN bis den epidermalen Wachstumsfaktor-Rezeptor Signaltransduktion Weg. Schlie&szlig;lich beobachteten wir, dass ITSN &Uuml;berexpression Aggregation von PolyQ erweiterten Androgenrezeptor (AR) sowie Wildtyp Versionen von Htt und AR schl&auml;gt eine breitere Beteiligung der ITSN bei neurodegenerativen Krankheiten durch Destabilisierung des PolyQ-haltige Proteine verst&auml;rkt.

Intersectin verbessert die Chorea Huntington-Aggregation und Neurodegeneration durch Aktivierung der c-Jun-NH2-Terminal Kinase.

Di Huntingon &egrave; una malattia neurodegenerativa progressiva derivanti dall&#39;espansione di un tratto delle poliglutamine (polyQ) nella proteina huntingtina (Htt) con conseguente aggregazione dei mutanti Htt in inclusioni nucleari e/o citosolici in neuroni. Htt mutante colpisce pi&ugrave; processi di degradazione delle proteine, trascrizione, trasduzione del segnale, trasporto assonale rapido e endocitosi [rivisto in Ross, C.A. e Poirier, M.A. (2005) parere: Qual &egrave; il ruolo di aggregazione proteica nella neurodegenerazione? Nat Rev Mol Cell. Biol, 6, 891-898]. Qui, segnaliamo che la trasduzione del segnale ed endocitico impalcatura intersectin (ITSN) aumentata formazione di aggregati da mutante Htt attraverso l&#39;attivazione di la NH-c-Jun (2) - terminale chinasi (JNK) - MAPK pathway. Al contrario, mettendo a tacere ITSN o inibendo JNK attenuato formazione aggregato. Utilizzando un modello di Drosophila polyQ ripetizione malattia, abbiamo osservato che ITSN migliorato la neurotossicit&agrave; mediata da polyQ. Un rapporto di reciprocit&agrave; &egrave; stato osservato tra ITSN e Htt. Mentre ITSN maggiore tossicit&agrave; e aggregazione Htt, Htt, a sua volta, ha inibito la cooperativit&agrave; tra ITSN e il pathway di trasduzione epidermal growth factor receptor segnale. Infine, abbiamo osservato che la sovraespressione ITSN rafforzata aggregazione del recettore androgeno polyQ-espanso (AR) cos&igrave; come le versioni di selvaggio-tipo di Htt e suggerendo un pi&ugrave; ampio coinvolgimento di ITSN nelle malattie neurodegenerative attraverso la destabilizzazione delle proteine contenenti polyQ AR.

Intersectin migliora la huntingtina aggregazione e neurodegenerazione attraverso l&#39;attivazione di c-Jun-NH2-terminal kinase.

Huntingon&#x75C5;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6838;&#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5C01;&#x5165;&#x4F53;&#x306B;&#x5909;&#x7570;HTT&#x306E;&#x51DD;&#x96C6;&#x3067;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30CF;&#x30F3;&#x30C1;&#x30F3;&#x30C1;&#x30F3;&#xFF08;HTT&#xFF09;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#xFF08;polyQ&#xFF09;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x306E;&#x62E1;&#x5927;&#x306B;&#x200B;&#x200B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x9032;&#x884C;&#x6027;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x5909;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x5909;&#x7570;Htt&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x3001;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3001;&#x9AD8;&#x901F;&#x8EF8;&#x7D22;&#x8F38;&#x9001;&#x3068;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;[&#x30ED;&#x30B9;&#x3001;CA&#x3068;&#x30DD;&#x30EF;&#x30EA;&#x30A8;&#x3001;MA&#xFF08;2005&#xFF09;&#x306E;&#x610F;&#x898B;&#x3067;&#x306F;&#x65E5;&#xFF1A;&#x795E;&#x7D4C;&#x5909;&#x6027;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x51DD;&#x96C6;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x4F55;&#x3067;&#x3059;&#x304B;&#xFF1F;&#x30CA;&#x30C3;&#x30C8;&#x3002;&#x30E2;&#x30EB;&#x7267;&#x5E2B;&#x3002;&#x30BB;&#x30EB;&#x3002; Biol&#x3002;&#x3001;6&#x3001;891&#x304B;&#x3089;898]&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3068;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x8DB3;&#x5834;intersectin&#xFF08;ITSN&#xFF09;&#x306F;c-Jun&#x306E;-NH&#xFF08;2&#xFF09;&#x672B;&#x7AEF;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;JNK&#xFF09;-MAPK&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x5909;&#x7570;Htt&#x306E;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x51DD;&#x96C6;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9006;&#x306B;&#x3001;ITSN&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x963B;&#x5BB3;JNK&#x6E1B;&#x8870;&#x51DD;&#x96C6;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x9ED9;&#x3089;&#x305B;&#x305F;&#x3002; polyQ&#x30EA;&#x30D4;&#x30FC;&#x30C8;&#x75C5;&#x306E;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;ITSN&#x5F37;&#x5316;polyQ&#x4ECB;&#x5728;&#x795E;&#x7D4C;&#x6BD2;&#x6027;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x76F8;&#x4E92;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306F;&#x3001;ITSN&#x3068;Htt&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; ITSN&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;Htt&#x306E;&#x51DD;&#x96C6;&#x3068;&#x6BD2;&#x6027;&#x3001;HTT&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;&#x9806;&#x756A;&#x306B;&#x3001;ITSN&#x3068;&#x4E0A;&#x76AE;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x5354;&#x540C;&#x6027;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;polyQ  - &#x62E1;&#x5F35;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;AR&#xFF09;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;polyQ&#x542B;&#x6709;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x795E;&#x7D4C;&#x5909;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;ITSN&#x306E;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x95A2;&#x4E0E;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;Htt&#x306E;&#x3068;AR&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x306E;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x305D;&#x306E;ITSN&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x304C;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x51DD;&#x96C6;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

Intersectin&#x306F;&#x3001;C-JUN-NH2&#x672B;&#x7AEF;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30CF;&#x30F3;&#x30C1;&#x30F3;&#x30C1;&#x30F3;&#x51DD;&#x96C6;&#x3068;&#x795E;&#x7D4C;&#x5909;&#x6027;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;

Huntingon&#xC758; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC740; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD575; &#xBC0F; cytosolic &#xD3EC;&#xD568;&#xC73C;&#xB85C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; Htt&#xC758; &#xC9D1;&#xACC4;&#xC5D0; &#xB530;&#xB978; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; huntingtin (Htt)&#xC5D0;&#xC11C; polyglutamine (polyQ)&#xB85C;&#xC758; &#xD655;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC9C4;&#xBCF4;&#xC801;&#xC778; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC774; &#xC774;&#xB2E4;. &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; Htt &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC800;&#xD558;, &#xC804;&#xC0AC;, &#xC2E0;&#xD638; &#xBCC0;&#xD658;, &#xBE60;&#xB978; axonal &#xC804;&#xC1A1; endocytosis &#xB4F1; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; [&#xB85C;&#xC2A4;, &#xCE98;&#xB9AC;&#xD3EC;&#xB2C8;&#xC544; &#xBC0F; Poirier, &#xC11D;&#xC0AC; (2005) &#xC758;&#xACAC; &#xAC80;&#xD1A0;: neurodegeneration&#xC5D0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC9D1;&#xB2E8;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC740; &#xBB34;&#xC5C7; &#xC778;&#xAC00;? Nat. &#xB808; &#xBE0C; Mol. &#xC140;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Biol., 6, 891-898]. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; c-6 &#xC6D4;-&#xB274; &#xD584;&#xD504;&#xC154; (2)-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xD0A4; (JNK)&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; Htt &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC758;&#xD574; &#xC9D1;&#xACC4; &#xD615;&#xC131; &#xC99D;&#xAC00; endocytic &#xBC0F; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC; &#xBE44; &#xACC4; intersectin (ITSN) &#xBCF4;&#xACE0;-MAPK &#xACBD;&#xB85C;. &#xBC18;&#xB300;&#xB85C; &#xC785;&#xC744; ITSN JNK&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xB610;&#xB294; &#xC9D1;&#xACC4; &#xD615;&#xC131; &#xAC10;&#xC1E0;. &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; polyQ &#xBC18;&#xBCF5; &#xC9C8;&#xD658;, ITSN &#xD5A5;&#xC0C1; polyQ &#xC911;&#xC7AC; neurotoxicity &#xAD00;&#xCC30; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. ITSN&#xACFC; Htt &#xC0AC;&#xC774; &#xC0C1;&#xD638; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4;. ITSN Htt &#xC9D1;&#xACC4; &#xBC0F; &#xB3C5;&#xC131;&#xC744; &#xAC15;&#xD654; &#xD558;&#xBA74;&#xC11C; Htt, &#xCC28;&#xB840;&#xB85C; ITSN&#xC640; &#xD45C; &#xD53C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC; &#xACBD;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC774; cooperativity&#xC744; &#xC800;&#xD574;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; ITSN overexpression polyQ &#xD655;&#xC7A5; &#xC548; &#xB4DC;&#xB85C; &#xAC90; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (AR)&#xC758; &#xC9D1;&#xACC4; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xBC84;&#xC804; Htt&#xC640; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; polyQ &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBD88;&#xC548;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xC9C8;&#xD658;&#xC5D0; ITSN&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xCC38;&#xC5EC;&#xB97C; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; AR&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4;.

Intersectin huntingtin &#xC9D1;&#xACC4; &#xBC0F; c 6 &#xC6D4; NH2 &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; neurodegeneration&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La enfermedad de Huntington es una enfermedad neurodegenerativa progresiva derivada de la expansi&#xF3;n de una poliglutaminas (polyQ) las v&#xED;as de la prote&#xED;na huntingtina (htt), resultando en la agregaci&#xF3;n de htt mutante en inclusiones nucleares y / o citos&#xF3;lico en las neuronas. Htt mutante afecta a varios procesos, incluyendo la degradaci&#xF3;n de prote&#xED;nas, transcripci&#xF3;n, transducci&#xF3;n de se&#xF1;ales, el transporte axonal r&#xE1;pido y endocitosis [revisado en Ross, California, y Poirier, MA (2005) Opini&#xF3;n: &#xBF;cu&#xE1;l es el papel de la agregaci&#xF3;n de prote&#xED;nas en la neurodegeneraci&#xF3;n? Nat. Rev. Mol. De la c&#xE9;lula. Biol.., 6, 891-898]. En este sentido, informan de que el tr&#xE1;fico vesicular y transducci&#xF3;n de se&#xF1;ales andamio intersectin (ITSN) aument&#xF3; la formaci&#xF3;n de agregados de htt mutante trav&#xE9;s de la activaci&#xF3;n de la c-Jun-NH (2)-terminal quinasa (JNK)-MAPK. Por el contrario, el silenciamiento o inhibici&#xF3;n de JNK ITSN la formaci&#xF3;n de agregados atenuada. Utilizando un modelo de Drosophila para la enfermedad de repetici&#xF3;n polyQ, se observ&#xF3; que una mayor ITSN polyQ neurotoxicidad mediada. Una relaci&#xF3;n rec&#xED;proca se observ&#xF3; entre ITSN y htt. Mientras ITSN mejorada htt agregaci&#xF3;n y toxicidad, htt, a su vez, inhibe la cooperatividad entre ITSN y el factor de crecimiento epid&#xE9;rmico receptor v&#xED;a de transducci&#xF3;n de se&#xF1;al. Por &#xFA;ltimo, se observ&#xF3; que la agregaci&#xF3;n de la sobreexpresi&#xF3;n ITSN mejorada de polyQ ampliado-receptor de andr&#xF3;genos (AR), as&#xED; como de tipo salvaje versiones de ambos htt y AR lo que sugiere una mayor participaci&#xF3;n de ITSN en las enfermedades neurodegenerativas a trav&#xE9;s de la desestabilizaci&#xF3;n de polyQ prote&#xED;nas que contienen.

Mejora la agregaci&#xF3;n de huntingtina Intersectin y neurodegeneraci&#xF3;n trav&#xE9;s de la activaci&#xF3;n de c-Jun NH2-terminal quinasa

&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x6291;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x53D7;&#x4F53;&#x53D1;&#x51FA;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x800C;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x541E;&#x8FD8;&#x5145;&#x5F53;&#x4E86;&#x6761;&#x5757;&#x5206;&#x5272;&#x7684;&#x8702;&#x7A9D;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5E73;&#x53F0;&#x3002;Intersectin (ITSN) &#x662F;&#x591A;&#x57DF;&#x7684;&#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x89C4;&#x7BA1;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;&#x5177;&#x6709;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x89C4;&#x7BA1;&#x5404;&#x79CD;&#x751F;&#x5316;&#x9014;&#x5F84;&#x901A;&#x8FC7;&#x5176;&#x591A;&#x4E2A;&#x6A21;&#x5757;&#x5316;&#x57DF;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x89E3;&#x51B3; ITSN &#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x5728;&#x8C03;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x4E0E;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x90FD;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x77ED;&#x53D1;&#x5939; Rna &#x7A33;&#x5B9A;&#x5B89;&#x9759; ITSN &#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;ITSN &#x8868;&#x8FBE;&#x663E;&#x8457;&#x51CF;&#x5C11;&#x589E;&#x52A0;&#x795E;&#x7ECF;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x521D;&#x7EA7;&#x76AE;&#x5C42;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x3002;&#x5947;&#x602A;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;ITSN &#x7684;&#x635F;&#x5931;&#x5E76;&#x4E0D;&#x5BFC;&#x81F4;&#x541E;&#x9014;&#x5F84;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x7F3A;&#x9677;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x5206;&#x6790;&#x786E;&#x5B9A;&#x7C7B;&#x4E8C;&#x78F7;&#x8102;&#x9170;&#x808C;&#x9187; 3-&#x6FC0;&#x9176; C2beta (&#x808C;&#x9187;-C2beta&#xFF09; &#x4F5C;&#x4E3A; ITSN &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E; ITSN &#x53EF;&#x89C4;&#x7BA1;&#x808C;&#x9187;-C2beta-AKT &#x751F;&#x5B58;&#x9014;&#x5F84;&#x3002;ITSN &#x5185;&#x819C;&#x56CA;&#x6CE1;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5B50;&#x96C6;&#x4E0A;&#x7684;&#x4E0E;&#x808C;&#x9187; C2beta &#x5173;&#x8054;&#x548C;&#x589E;&#x5F3A;&#x57FA;&#x5E95;&#x548C;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x523A;&#x6FC0;&#x808C;&#x9187; C2beta &#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x5BFC;&#x81F4; AKT &#x6D3B;&#x5316;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x836F;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3001; &#x5360;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x5730;&#x4F4D;&#x7684;&#x5E95;&#x7247;&#x548C;&#x6551;&#x63F4;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x663E;&#x793A;&#x808C;&#x9187;-C2beta &#x548C; AKT &#x4E0A;&#x4F4D;&#x5230; ITSN&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x793A; ITSN&#xFF0C;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5176;&#x4F5C;&#x7528;&#x8C03;&#x8282;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x5B58;&#x6240;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9996;&#x6B21;&#x5C55;&#x793A;&#x3002;

&#x901A;&#x8FC7; intersectin-&#x78F7;&#x9178;&#x808C;&#x9187; 3-&#x6FC0;&#x9176; C2beta AKT &#x9014;&#x5F84;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x5B58;&#x6D3B;&#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#x3002;

While endocytosis attenuates signals from plasma membrane receptors, recent studies suggest that endocytosis also serves as a platform for the compartmentalized activation of cellular signaling pathways. Intersectin (ITSN) is a multidomain scaffolding protein that regulates endocytosis and has the potential to regulate various biochemical pathways through its multiple, modular domains. To address the biological importance of ITSN in regulating cellular signaling pathways versus in endocytosis, we have stably silenced ITSN expression in neuronal cells by using short hairpin RNAs. Decreasing ITSN expression dramatically increased apoptosis in both neuroblastoma cells and primary cortical neurons. Surprisingly, the loss of ITSN did not lead to major defects in the endocytic pathway. Yeast two-hybrid analysis identified class II phosphoinositide 3'-kinase C2beta (PI3K-C2beta) as an ITSN binding protein, suggesting that ITSN may regulate a PI3K-C2beta-AKT survival pathway. ITSN associated with PI3K-C2beta on a subset of endomembrane vesicles and enhanced both basal and growth factor-stimulated PI3K-C2beta activity, resulting in AKT activation. The use of pharmacological inhibitors, dominant negatives, and rescue experiments revealed that PI3K-C2beta and AKT were epistatic to ITSN. This study represents the first demonstration that ITSN, independent of its role in endocytosis, regulates a critical cellular signaling pathway necessary for cell survival.

Regulation of neuron survival through an intersectin-phosphoinositide 3'-kinase C2beta-AKT pathway.

Bien que l&#x26;#39;endocytose att&#xE9;nue les signaux provenant des r&#xE9;cepteurs membranaires, des &#xE9;tudes r&#xE9;centes sugg&#xE8;rent que l&#x26;#39;endocytose sert aussi de plate-forme pour l&#x26;#39;activation compartiment&#xE9;e des voies de signalisation cellulaire. Intersectine (ITSN) est une prot&#xE9;ine d&#x26;#39;&#xE9;chafaudage multidomaine qui r&#xE9;gule l&#x26;#39;endocytose et a le potentiel pour r&#xE9;glementer diff&#xE9;rentes voies biochimiques &#xE0; travers ses multiples domaines modulaires. Pour faire face &#xE0; l&#x26;#39;importance biologique de ITSN dans la r&#xE9;gulation de voies de signalisation cellulaire par rapport &#xE0; l&#x26;#39;endocytose, nous avons r&#xE9;duit au silence l&#x26;#39;expression stable ITSN dans les cellules neuronales en utilisant des ARN en &#xE9;pingle &#xE0; cheveux courts. Diminution de l&#x26;#39;expression ITSN consid&#xE9;rablement augment&#xE9; l&#x26;#39;apoptose dans les cellules de neuroblastome et les deux principaux neurones corticaux. &#xC9;tonnamment, la perte de ITSN n&#x26;#39;a pas conduit &#xE0; des d&#xE9;fauts majeurs dans la voie d&#x26;#39;endocytose. Deux hybrides de levure analyse a identifi&#xE9; la classe II phosphoinositide 3&#x26;#39;-kinase C2beta (PI3K-C2beta) comme une prot&#xE9;ine de liaison ITSN, ce qui sugg&#xE8;re que ITSN peut r&#xE9;glementer un voie de survie PI3K-AKT-C2beta. ITSN associ&#xE9;e &#xE0; la PI3K-C2beta sur un sous-ensemble de v&#xE9;sicules endomembranaire et am&#xE9;lior&#xE9; &#xE0; la fois la base et le facteur de croissance stimul&#xE9;e par la voie PI3K-C2beta activit&#xE9;, r&#xE9;sultant en une activation AKT. L&#x26;#39;utilisation d&#x26;#39;inhibiteurs pharmacologiques, n&#xE9;gatifs dominants, et des exp&#xE9;riences de sauvetage a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que la voie PI3K-AKT et C2beta &#xE9;taient &#xE9;pistatique &#xE0; ITSN. Cette &#xE9;tude repr&#xE9;sente la premi&#xE8;re d&#xE9;monstration que ITSN, ind&#xE9;pendant de son r&#xF4;le dans l&#x26;#39;endocytose, r&#xE9;glemente une voie de signalisation cellulaire critique n&#xE9;cessaire &#xE0; la survie cellulaire.

R&#xE8;glement de la survie des neurones Gr&#xE2;ce &#xE0; un intersectine-phosphoinositide 3&#x26;#39;-kinase Akt-C2beta

Wenn Endozytose Signale von Plasma Membranrezeptoren d&auml;mpft, deuten neuere Studien, dass die Endozytose dient auch als Plattform f&uuml;r die zergliederten Aktivierung der zellul&auml;ren Signalisierung Wege. Intersectin (ITSN) ist ein mit Ger&uuml;sten-Protein, die Endozytose reguliert und hat das Potenzial zur Regulierung von verschiedenen biochemischen Bahnen durch seine mehrere, modulare Dom&auml;nen. Um die biologische Bedeutung der ITSN bei der Regulierung der zellul&auml;re Signalwege in Endozytose im Vergleich zu beheben, haben wir stabil ITSN Ausdruck in Nervenzellen verstummen, mit kurzen Haarnadel RNAs. ITSN Ausdruck drastisch verringern, erh&ouml;ht Apoptosis in den Neuroblastoma Zellen und prim&auml;ren kortikalen Neuronen. &Uuml;berraschenderweise f&uuml;hrte der Verlust von ITSN nicht zu gro&szlig;e M&auml;ngel in der endocytic Weg. Hefe-zwei-Hybrid-Analyse identifiziert die Klasse II Phosphoinositide 3&#39;-Kinase C2beta (PI3K-C2beta) als ein ITSN verbindliches Protein, darauf hindeutet, dass ITSN PI3K-C2beta-AKT &uuml;berleben Weg Regeln kann. ITSN zugeordnete PI3K-C2beta auf einer Untermenge von Endomembrane Bl&auml;schen und zur Verbesserung der basalen und Wachstumsfaktor stimuliert PI3K-C2beta T&auml;tigkeit, was zu AKT Aktivierung. Die Verwendung von pharmakologische Inhibitoren, dominante negative und Rettung Experimente ergaben, dass PI3K-C2beta und AKT zu ITSN epistatic waren. Diese Studie stellt die erste Demonstration, dass ITSN, unabh&auml;ngig von seiner Rolle bei der Endozytose, eine kritische zellular signalisieren Weg notwendig f&uuml;r das &Uuml;berleben der Zelle reguliert.

Verordnung von Neuron &Uuml;berleben durch eine intersectin-Phosphoinositid-3&#39;-Kinase-C2beta-AKT-Pathway.

Mentre endocitosi attenua segnali dai recettori di membrana plasmatica, studi recenti suggeriscono che endocitosi serve anche come una piattaforma per l&#39;attivazione delle vie di segnalazione cellulare compartimenti stagni. Intersectin (ITSN) &egrave; una proteina multidominio ponteggi che regolamenta endocitosi e ha il potenziale per regolamentare le varie vie biochimiche attraverso il suo multiplo, domini modulari. Per affrontare l&#39;importanza biologica della ITSN nella regolazione cellulare segnalazione percorsi versus in endocitosi, noi abbiamo messo a tacere stabile espressione ITSN in cellule neuronali tramite short hairpin RNAs. Diminuzione espressione ITSN drammaticamente aumentato apoptosis in cellule di neuroblastoma e neuroni corticali primari. Sorprendentemente, la perdita di ITSN non ha portato ai principali difetti nel percorso endocitico. Lievito analisi dei due ibridi identificata classe II fosfoinositide 3-chinasi C2beta (PI3K-C2beta) come una proteina ITSN, suggerendo che ITSN pu&ograve; disciplinare un percorso di sopravvivenza PI3K-AKT-C2beta. ITSN associato PI3K-C2beta su un sottoinsieme delle endomembrane vescicole e maggiore attivit&agrave; di PI3K-C2beta basale e stimolata dal fattore di crescita, con conseguente attivazione di AKT. L&#39;uso di inibitori farmacologici negativi dominanti ed esperimenti di salvataggio ha rivelato che PI3K-C2beta e AKT erano epistatici a ITSN. Questo studio rappresenta la prima dimostrazione che ITSN, indipendente del suo ruolo nell&#39;endocitosi, regola un critico cellular signaling pathway necessarie per la sopravvivenza delle cellule.

Regolamento di sopravvivenza neurone attraverso un intersectin-fosfoinositide 3&#39;-chinasi AKT C2beta via.

&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x6E1B;&#x200B;&#x200B;&#x8870;&#x3055;&#x305B;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x533A;&#x5206;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; Intersectin&#xFF08;ITSN&#xFF09;&#x306F;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30E9;&#x30FC;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x79D8;&#x3081;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x8DB3;&#x5834;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;ITSN&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x306B;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x3066;&#x77ED;&#x9396;&#x30D8;&#x30A2;&#x30D4;&#x30F3;RNA&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;ITSN&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x6C88;&#x9ED9;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6E1B;&#x5C11;ITSN&#x5F0F;&#x304C;&#x5287;&#x7684;&#x306B;&#x795E;&#x7D4C;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x816B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x4E00;&#x6B21;&#x76AE;&#x8CEA;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x3001;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x9A5A;&#x304F;&#x3079;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;ITSN&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x6B20;&#x9665;&#x306B;&#x306F;&#x81F3;&#x3089;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x30C4;&#x30FC;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;ITSN&#x306F;&#x3001;PI3K-C2beta-AKT&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;ITSN&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;II&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C1;&#x30C9;3&#x26;#39;-&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;C2beta&#xFF08;PI3K-C2beta&#xFF09;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x5206;&#x6790;&#x3002; ITSN&#x306F;&#x3001;AKT&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x5185;&#x819C;&#x5C0F;&#x80DE;&#x3068;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x57FA;&#x5E95;&#x3068;&#x6210;&#x9577;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x56E0;&#x5B50;&#x523A;&#x6FC0;PI3K-C2beta&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;PI3K-C2beta&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3001;&#x30C9;&#x30DF;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30CD;&#x30AC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3001;&#x6551;&#x52A9;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;PI3K-AKT C2beta&#x3068;&#x306F;ITSN&#x306B;&#x30A8;&#x30D4;&#x30B9;&#x30BF;&#x30B7;&#x30B9;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;ITSN&#x304C;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x521D;&#x3081;&#x3066;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Intersectin-&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C1;&#x30C9;3&#x26;#39;-&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;C2beta-AKT&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x751F;&#x5B58;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;

&#xBC18;&#xBA74; endocytosis &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xB9C9; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC2E0;&#xD638; &#xC57D;&#xD654;, &#xCD5C;&#xADFC; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC81C;&#xC548; &#xADF8; endocytosis &#xB610;&#xD55C; &#xD55C;&#xC815;&#xB41C; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC; &#xC5ED;&#xD560;. Intersectin (ITSN)&#xC740; endocytosis &#xADDC;&#xC81C; &#xBC0F; &#xADDC;&#xC81C;&#xC758; &#xBC30;&#xC218;&#xB85C; &#xD1B5;&#xD574; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801; &#xACBD;&#xB85C;&#xB97C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xB2E4;&#xC911; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBE44; &#xACC4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBAA8;&#xB4C8;&#xD615; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;. Endocytosis&#xC5D0;&#xC11C; &#xB300; &#xC138;&#xD3EC; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C; &#xC870;&#xC808;&#xC5D0; ITSN&#xC758; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC548;&#xC815;&#xC801; RNAs &#xC9E7;&#xC740; &#xBA38;&#xB9AC; &#xD540;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; ITSN &#xC2DD; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xCE68;&#xBB35; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xBCF8; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC; apoptosis &#xC99D;&#xAC00; ITSN &#xC2DD;&#xC744; &#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC10;&#xC18C;. &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;, ITSN &#xC190;&#xC2E4; endocytic &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xACB0;&#xD568;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C8; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xD6A8; &#xBAA8; 2 &#xC7A1;&#xC885; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB41C; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; II phosphoinositide 3&#39;-&#xB2C8; C2beta (PI3K-C2beta) ITSN PI3K-C2beta-AKT &#xC0DD;&#xC874; &#xD1B5;&#xB85C; &#xADDC;&#xC81C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xB41C; ITSN &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C;. ITSN PI3K-c2beta&#xC640; endomembrane vesicles&#xC758; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xBC0F; AKT &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xB530;&#xB978; &#xAE30;&#xC800; &#xBC0F; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; &#xC790;&#xADF9; PI3K C2beta &#xD65C;&#xB3D9; &#xAC15;&#xD654;. &#xC57D;&#xB9AC; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;, &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xC81C;&#xC678; &#xD558; &#xACE0; &#xAD6C;&#xC870; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC0AC;&#xC6A9; PI3K C2beta &#xBC0F; AKT ITSN epistatic &#xD588;&#xB2E4; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xB370;&#xBAA8;&#xB97C; ITSN, endocytosis&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0; &#xAD00;&#xACC4; &#xC5C6;&#xC774; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xC2E0;&#xD638; &#xD1B5;&#xB85C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xADDC;&#xC81C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Intersectin-phosphoinositide 3&#39;-&#xD0A4; C2beta-AKT &#xACBD;&#xB85C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C;.

Mientras que la endocitosis aten&#xFA;a las se&#xF1;ales de los receptores de la membrana plasm&#xE1;tica, estudios recientes sugieren que la endocitosis tambi&#xE9;n sirve como una plataforma para la activaci&#xF3;n compartimentada de v&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n celular. Intersectin (ITSN) es una prote&#xED;na multidominio andamiaje que regula la endocitosis y tiene el potencial para regular diversas v&#xED;as bioqu&#xED;micas a trav&#xE9;s de sus varios dominios, modulares. Para hacer frente a la importancia biol&#xF3;gica de ITSN en la regulaci&#xF3;n de v&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n celular en comparaci&#xF3;n con en la endocitosis, que han silenciado de forma estable la expresi&#xF3;n ITSN en las c&#xE9;lulas neuronales mediante el uso de ARN de horquilla corta. La disminuci&#xF3;n de la expresi&#xF3;n dram&#xE1;tica ITSN aumento de la apoptosis en c&#xE9;lulas de neuroblastoma y los dos principales neuronas corticales. Sorprendentemente, la p&#xE9;rdida de ITSN no dio lugar a graves defectos en la v&#xED;a endoc&#xED;tica. Levadura de dos h&#xED;bridos de an&#xE1;lisis identificaron la clase II phosphoinositide 3&#x26;#39;-quinasa C2beta (PI3K-C2beta) como una prote&#xED;na de uni&#xF3;n ITSN, lo que sugiere que ITSN puede regular una v&#xED;a de supervivencia PI3K-AKT C2beta. ITSN asociado con PI3K C2beta en un subconjunto de ves&#xED;culas endomembrane y mejorado tanto basal como factor de crecimiento estimulado PI3K C2beta actividad, lo que resulta en la activaci&#xF3;n de AKT. El uso de inhibidores farmacol&#xF3;gicos, negativos dominantes, y los experimentos de rescate revel&#xF3; que la PI3K-AKT C2beta y fueron epistatic a ITSN. Este estudio representa la primera demostraci&#xF3;n de que ITSN, independiente de su papel en la endocitosis, regula una v&#xED;a de se&#xF1;alizaci&#xF3;n celular cr&#xED;tica necesaria para la supervivencia celular.

La regulaci&#xF3;n de la supervivencia neuronal A trav&#xE9;s de un Intersectin-phosphoinositide 3&#x26;#39;-quinasa-Akt v&#xED;a C2beta

The receptor for activated C-kinase 1 (RACK1) is a highly conserved WD40 repeat scaffold protein found in a wide range of eukaryotic species from Chlamydymonas to plants and humans. In tissues of higher mammals, RACK1 is ubiquitously expressed and has been implicated in diverse signaling pathways involving neuropathology, cellular stress, protein translation, and developmental processes. RACK1 has established itself as a scaffold protein through physical interaction with a myriad of signaling proteins ranging from kinases, phosphatases, ion channels, membrane receptors, G proteins, IP3 receptor, and with widely conserved structural proteins associated with the ribosome. In the plant Arabidopsis thaliana, RACK1A is implicated in diverse developmental and environmental stress pathways. Despite the functional conservation of RACK1-mediated protein-protein interaction-regulated signaling modes, the structural basis of such interactions is largely unknown. Here we present the first crystal structure of a RACK1 protein, RACK1 isoform A from Arabidopsis thaliana, at 2.4 A resolution, as a C-terminal fusion of the maltose binding protein. The structure implicates highly conserved surface residues that could play critical roles in protein-protein interactions and reveals the surface location of proposed post-transcriptionally modified residues. The availability of this structure provides a structural basis for dissecting RACK1-mediated cellular signaling mechanisms in both plants and animals.

Structure of a signal transduction regulator, RACK1, from Arabidopsis thaliana.

Single-nucleotide polymorphisms (SNPs) in the human ether-a-go-go-related gene 1, hERG1, are associated with cardiac arrhythmias. The Kv11.1 channels encoded by hERG1 are also essential for rhythmic excitability of the pituitary, where they are regulated by thyroid hormone through a signal transduction cascade involving the phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) and the Ser/Thr-directed protein phosphatase, PP5. Here, we show that the hERG1 polymorphism at codon 897, which is read as a Thr instead of a Lys, creates a phosphorylation site for the Akt protein kinase on the Kv11.1 channel protein. Consequently, hormonal signaling through the PI3K signaling cascade, which normally stimulates K897 channels through PP5-mediated dephosphorylation, inhibits T897 channels through Akt-mediated phosphorylation. Thus, hormonal regulation of Kv11.1 in humans with the T897 polymorphism is predicted to prolong the QT interval of cardiac myocytes. A systematic bioinformatics search for SNPs in human ion channel genes identified 15 additional candidates for such "phosphorylopathies," which are predicted to create or destroy putative phosphorylation sites. Changes in protein phosphorylation might represent a general mechanism for the interaction of genetic variation and environment on human health.

The human ERG1 channel polymorphism, K897T, creates a phosphorylation site that inhibits channel activity.

Members of the intersectin (ITSN) family of scaffold proteins consist of multiple modular domains, each with distinct ligand preferences. Although ITSNs were initially implicated in the regulation of endocytosis, subsequent studies have revealed a more complex role for these scaffold proteins in regulation of additional biochemical pathways. In this study, we performed a high throughput yeast two-hybrid screen to identify additional pathways regulated by these scaffolds. Although several known ITSN binding partners were identified, we isolated more than 100 new targets for the two mammalian ITSN proteins, ITSN1 and ITSN2. We present the characterization of several of these new targets which implicate ITSNs in the regulation of the Rab and Arf GTPase pathways as well as regulation of the disrupted in schizophrenia 1 (DISC1) interactome. In addition, we demonstrate that ITSN proteins form homomeric and heteromeric complexes with each other revealing an added level of complexity in the function of these evolutionarily conserved scaffolds.

Intersectin (ITSN) family of scaffolds function as molecular hubs in protein interaction networks.

Several rapid physiological effects of thyroid hormone on mammalian cells in vitro have been shown to be mediated by the phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K), but the molecular mechanism of PI3K regulation by nuclear zinc finger receptor proteins for thyroid hormone and its relevance to brain development in vivo have not been elucidated. Here we show that, in the absence of hormone, the thyroid hormone receptor TRβ forms a cytoplasmic complex with the p85 subunit of PI3K and the Src family tyrosine kinase, Lyn, which depends on two canonical phosphotyrosine motifs in the second zinc finger of TRβ that are not conserved in TRα. When hormone is added, TRβ dissociates and moves to the nucleus, and phosphatidylinositol (3, 4, 5)-trisphosphate production goes up rapidly. Mutating either tyrosine to a phenylalanine prevents rapid signaling through PI3K but does not prevent the hormone-dependent transcription of genes with a thyroid hormone response element. When the rapid signaling mechanism was blocked chronically throughout development in mice by a targeted point mutation in both alleles of Thrb, circulating hormone levels, TRβ expression, and direct gene regulation by TRβ in the pituitary and liver were all unaffected. However, the mutation significantly impaired maturation and plasticity of the Schaffer collateral synapses on CA1 pyramidal neurons in the postnatal hippocampus. Thus, phosphotyrosine-dependent association of TRβ with PI3K provides a potential mechanism for integrating regulation of development and metabolism by thyroid hormone and receptor tyrosine kinases. 

A rapid cytoplasmic mechanism for PI3 kinase regulation by the nuclear thyroid hormone receptor, TRβ, and genetic evidence for its role in the maturation of mouse hippocampal synapses in vivo.

Central noradrenergic neurons, collectively defined by synthesis of the neurotransmitter norepinephrine, are a diverse collection of cells in the hindbrain, differing in their anatomy, physiological and behavioral functions, and susceptibility to disease and environmental insult. To investigate the developmental basis of this heterogeneity, we have used an intersectional genetic fate mapping strategy in mice to study the dorsoventral origins of the -derived locus coeruleus (LC) complex which encompasses virtually all of the anatomically defined LC proper, as well as a portion of the A7 and subcoeruleus (SubC) noradrenergic nuclei. We show that the noradrenergic neurons of the LC complex originate in two different territories of the  expression domain in the embryonic hindbrain. Consistent with prior studies, we confirm that the majority of the LC proper arises from the alar plate, the dorsal domain of the neural tube, as defined by expression of  . In addition, our analysis shows that a large proportion of the -derived A7 and SubC nuclei also originate in the  -defined alar plate. Surprisingly, however, we identify a smaller subpopulation of the LC complex that arises from outside the  expression domain. We characterize the distribution of these neurons within the LC complex, their cell morphology, and their axonal projection pattern. Compared to the broader LC complex, the newly identified  -negative noradrenergic subpopulation has very sparse projections to thalamic nuclei, suggestive of distinct functions. This developmental genetic analysis opens new avenues of investigation into the functional diversity of the LC complex.

Erica Scappini

Signal Transduction Laboratory

National Institute of Environmental Health Sciences

Laser-assisted Lentiviral Gene Delivery to Mouse Fertilized Eggs